3.7. Другие вирусы, представляющие интерес для шелководства

Среди энтомопатогенных ви р у со в есть таки е , которые п о к а еще
н е причастны к возникновению массовой гибели ш елковичных ч ер в
ей , но по отношению к которым ш ел к о во д ам следует п р о я в л я т ь ин терес.
У одних способность инфицировать тутового ш ел к оп р яд а все еще
н уж д а е т с я в достоверных данных, у д р у ги х эти улики — р е зу л ь т а т
вс его лишь лаб ораторных опытов, н.о есть и такие, которые з а я ви л и
о своей п отенциальной вредоносности непосредственно в п р о и зв о д ственной
обстановке.
Вирус гранулеза. К роду Ьаси-
lo v iriis, 'к его Б-подгруппе относится
вирус гр ан у л е з а (ВГ) насекомых.
Н ач ал о исследованиям этих вирусов
п оложил А. П ай о (1926), который
обн ар уж и л заболевание гусениц к а п у стной
белянки с призн аками , похожими
на ж е л ту х у шелковичных червей,
с белой, к а к молоко, мутной гемолимфой,
в которой, однако, отсу т ствовали
полиэдры. Пайо н а з в а л эту
болезнь ложной желтухой. В поле
зрен и я светового микроскопа с ф а зо вым
контрастом можно различить
множество мельчайших блестящих
зернышек (гр ан у л ). В дальнейшем
подобное заболевание обн аружи ли у
д р у ги х видов гусениц. Штейнхауз
(1947) внес ясность относительно
его принадлежности к вирусным болезням, а самих гр ан у л — к в к лю чениям
аналогичным полиэдрам (рис. 68). Б ер го л ьд (1948) и с с л ед э зэл
гр ан у лы и находящиеся в них вирионы под электронным м и к р о ск о пом.
Вирионы этой подгруппы палочковидных спиральных ви р у со в
со д ерж ат Д Н К с удвоенной н итью, но в отличие от вируса яд ерн ого
п оли эдроза вирионы заключены в протеиновую гр ан у л у более или
менее п р ави л ьн ой овальной формы. Они значительно меньше п оли эдров,
гр ан у лы по большой оси эл ли п са имеют всего 0 ,2—0,4 мкм (диаметр
полиэдров 3—4 мкм). Р азмеры ж е самих вирионов в обеих подгр
у п п ах довольно б ли зки . Обе подгруппы палочковидных вирусов
п о р аж аю т главным образом личиночную стадию некоторых бабочек;
пути за р аж ен и я и состав преимущественно поражаемых тканей т а к о й
ж е , к ак и при ядерном полиэдрозе. В обоих сл у ч а ях возможна т р ан с о в
а р и а л ь н а я и нфекция. Г р ан у лы образуются в я д р а х кле ток, п о сл е
р а зр уш ен и я я д р а они оказыв аются в цитоплазме. Гибели предшествуют
интенсивные гистологические процессы, в ходе которых в гемолимфе
о к азы в ае тся огромное количество гр ан у л из разрушенных клеток.
Типовой вид в подгруппе В — вирус гр ан у л е з а еловой л и с то вертки-
почкоеда (Ch o risto n eu ra fum iferan a ) из семейства л и с то в ер ток
(T o rtric id a e ) — опасного вредителя лесов Канады. Это насоко-
мое хорошо изучено, размнож ае тся в л аб о р а то ри ях на и ск у сс тв ен ном
корме, состоящем из измельченной бальзамической пихты, а г а т а
и д р ож ж е в о го ав то ли зат а. Оно одинаково успешно за р аж а е т с я в и р у сами
гр ан у л е з а и полиэдроза, к а к впрочем, и многие д р у ги е виды г у сениц.
В отличие от ВЯП, которому свойственна большая или меньшая
степень групповой специфичности, ВГ относится, по-виднмому, к б о лее
у зк о специализированным вирусам. ВЯП найден у представителей
семи отрядов насекомых, в том числе у 243 видов бабочек, ВГ о бн ар уж ен
п ок а то л ь к о у 65 видов бабочек, п ринадлежащих к различным се-

мействам, но не найден ни в к аки х д р у ги х о тр яд ах н ас ек омы х . Вероя
тн о , объяснением этому может служ и ть не тол ько особенность специали
зац и и ВГ, но и р а зн а я возможность его о бн ар уж ен и я , так как ,
в отличие от полиэдроза, уверенный ди а гн оз гр ан у л е з а с помощью
су х и х объективов в нативном препарате из-за их малых размеров
значител ьно менее доступен.
Гран ул ез не обнаружен у гусениц тутового ш ел к оп р яда , и попытки
з а р а зи т ь их этим вирусом, взятым у разных видов бабочек, о к а з а лись
безрезультатными. Все ж е эту подгруппу палочковидных ви р
у со в шелководам уп у ск а т ь из вида не следует. Г р ан у л е з ш и р о к о
р асп р о стр ан ен среди хлопковой и озимой совок, к ар ад ри ны — обы чных
вредителей хлоп ча тн и к а, посевы которых непосредственно с о седствуют
с насаждениями шелковицы. При всей своей жесткой п ри уроченности
к определенным видам насекомых, ВГ, к ак всякий иной
в и р у с , не за страхован от мутационной изменчивости, в том числе
т а к о й , которая сделает возможным поражение несвойственных ему
видов гусениц. Резуль тати вн ост ь химического м утагенеза в о тн о шении
ВГ описана в ли тературе ; вр яд ли существует п о л н а я г а р а н ти
я от мутагенного воздействия со стороны средств химизации, к о торы
е в возрастающем темпе и широком ассортименте поступают на
Вооружение сельского х о зяй с тв а . Эти предостережения нелишни еще
п потому, что ВГ передается трансовариал ьно. Вероятность о бн ар у ж
ен и я у гусениц гр ан у л е з а мутагенного происхождения скорее всего
можно было бы ж д а т ь от работников гр ен аж ны х заводов, которые
еж егодн о выполняют огромный объем м и кр о скоп и р о в ан и я . Однако
разреш ающ ая способность заводских микроскопов недостаточна и
п ри зн а к о в ложной ж ел ту хи Пайо тренеры не знают.
Р ад уж ны й вирус . Свое н а зван и е Irid o v iru s (греч. iris — радуга)
он получил б л а го д ар я приобретаемой пораженным насекомым особенности
— рад ужн ом у свечению голубого, сине-зеленого, фиолетового
и оранж евого цвета. Оно обусловлено к ристал лич еской стр у кту р ой
э ти х вирусов и х арак тером у к ладки его вирионов. Р адуж ный вирус
(РВ ) гшервые обн аружен у болотной долгоножки Ti pul a p a lu d o sa
M e ig ., насекомого семейства комаровидных T ip u lid e a (Ксерос, 1954).
Сп у с тя д в а де ся ти л ети я число видов насекомых, у которых он обнар
уж е н , дос ти гл о 49 и п ри н ад л еж а т они к пяти отрядам; чаще всего
его н а х о д я т у к омаров и бабочек.
Типовым видом РВ я в л я е т с я вирус болотной до л гон ож ки . Он
относится к гр у п п е сферических вирусов, вирионы которого изометрич-
ны, диаметр 0 ,1 3—0,24 мкм; в проекции они имеют гекса гональный
(шестиугольный) к он ту р , икосаэдрическую (20-гранную) симметрию.
Вн у три стр у кту рн ой оболочки из вирусного белка, образующего к ап сид,
находится двой н ая полинуклеотидная нить Д Н К . На у л ь т р а -
то н к и х сре зах под электронным микроскопом ск опл ение радужного
ви р у с а в пораженной им тк ан и напоминает ломоть пчелиных сотов,
в котором к аж д а я яч ей к а представлена отдельным вирионом (рнс. 69).
П р а в и л ьн а я у п ак о в к а э ти х однородных стр у кту рны х единиц похожа
н а р е гу л я р н о е строение к ри стал л о в , но в отличие от истинных тр е х мерных
к р и с т ал л о в она у РВ х ар ак тери зу е тс я рыхлой у к ладк ой с вл аж-

ными промежутками между ними. В таком к р и с т а л л е ги др а ти р э зан ны е
частицы не к он так ти р ую т д р у г с другом и разделены слоем рас творител
я толщиной о к о л о 0 ,5 н м ; кри стал л с в я зан си л ами,действующими
н а расстояние 1/3— 1/5 размера самих ви рионов. Концентрация ви р у с а
в таком влажном к ристал ле сос тавл яет то л ь к о 17% от массы к р и с
т ал л а .
Ворота инфекции дл я РВ недостаточно ясны. Скармливание в и р у са
его естественному х о зяи н у или к акому-либо иному восприимчивому
насекомому приводит к весьма незначительному проценту з а р аж е н
и я . Тот же вирус оказывается гораздо более инфекционен при его
впрыскивании в общую полость насекомого. При попытке об ь я сн и ть
н изкую инфекционность радужного ви р у с а личинки комара А э ^ з
ta e n io rh y n c h u s при зар аж ен и и через кишечник было у становл ено,
что вирионы р азрушаются в переднем отделе средней кишки (Штолц
и Саммерс, 1972). Отмечена т а кж е эффективность п реграж д ающ ей
функции перитрофической мембраны, строение которой в отличие от
с т р у к ту ры ее у личинок чешуекрылых не имеет за зо р о в , д о п у ск аю щ и х
проникновение вирус а. Предположительно Р В может о к а за т ь с я в о зл е
эпителия кишечника, проникнув через р ед ки е р азры вы в перитрофической
мембране или ж е пройдя ск во зь нее в виде к аки х -то особо м ел ки
х инфекционных единиц, быть может, вирусного Д Н К .
Если д л я личинки болотной долгоножки кишечник я в л я е т с я ед и н ственно
доступными воротами инфекции д л я РВ , то дл я комара з а р а жен
и е возможно не то л ько через кишечник, но и тр ан со в ари ал ьн о .
Органами личинки, преимущественно зараж аемыми РВ , я в л яю т ся
жировое тело, клетки кожных покровов и имагиальные д и ски . По мере
распространения вируса в организме больного насекомого я вл ен и е
р адужнос ти можно наблюдать во многих д р у ги х т к ан я х , в том числе
в шелксотделительной жел езе .
Вирионы формируются в цитоплазме, на участке вирогенной
стромы (в вироплазме). З а р аж ен и е впрыскиванием РВ комара в общую
полость гусеннцы большой вощинной моли п о к а зало , что в о зн и кн о в е ние
вироплазмы, наблюдаемое через день после инъекции, вызывается
присутствием введенного вируса. В то время, к а к вирусный
структурный белок формируется возле вироплазмы, Д Н К ви р у с а
располагается в ней целиком. Неясным остается вопрос, что о б р а зу ется
первым: нуклеоиды или капсиды, и в каком п оряд ке происходит
сборка вирнонов. В отношении РВ москита Д эви д (1975) предполагает,
что капсид вириона обра зуе тся раньше, а сердцевинная с т р у к т у р а—
нуклеоид вводится в него позже.
В серологическом отношении РВ х ар ак тери зу е тс я значительным
содержанием постоянно обнаруживаемых групповых, общих д л я
этого вируса, антигенов. Н а р я д у с этим, вирусы различных н а с ек о мых
не строго идентичны и их антигены со д ерж а т видоспецифические
детерминанты, которыми отмечена их видовая и н ди в и д у аль ность.
Ни зки й уровень инфекционности РВ при зар аж ен и и им насекомых
естественным путем — через рот, резко кон тр ас ти р у ет не то л ь к о
с высокой восприимчивостью при непосредственном з ар аж ен и и гемолимфы,
но и проявл яющейся при этом в широких гр ан и ц а х сп ец и а лизации
. Многочисленные опыты с перекрестным заражением разли чны х
отрядов, семейств и видов насекомых этим способом в полной мере
п о к азали отсутствие строгой специфичности у этого вирус а. К Р В болотной
дол гоножки о к а за ли с ь восприимчивы гусеницы непарного ш ел к
оп р яд а , большой вощинной моли, к ап устной бел ян ки , личинки
восточного майского ж у к а , представители к л а с с а клещей (в частности,
паутинных) и т. д . К этому виду РВ о к а за л и с ь восприимчивы
к у к о л ки и гусеницы тутового ш елк оп ряда . РВ ав с тр али й ск о го ж у к а
S e ric e sth is p ru in o sa D a lm an такж е способен вызывать заболевание при
инфицировании общей полости у насекомых, п ринадл еж ащих к р а з личным
систематическим группам, в том числе и гусениц тутового
ш елкопряда .
Энтомопоксвирус — вирус оспы насекомых. Оспа — собиратель ное
н а зван и е обширной группы вирусных болезней человека и ж и в о т ных.
Вирус н а ту р ал ьн о й оспы человека стал едва ли не первым вирусом,
который удалось увидеть людям; б л а го д ар я относительно
к рупным размерам его можно обн ар уж и т ь с помощью обычного св етового
м и кроскоп а , в ок рашен ны х п р еп ар а т ах из срезов пораженных
тк ан ей , где он представлен кокковидными включениями, получившими
н а зв ан и е тел ец Паш ен а. Д л я вирусов семейства оспы было уст ановлено
наименование P o x v iru s e s.
В нач але 60-х годов Б . Юрпэн в Б р е тан и (Ф ран ц и я ) о б н а р уж и л
болезнь личинок майского х р ущ а, в жировом тел е которого н аб лю д
а л и с ь своеобразные вк лю ч ен и я . К . В а го (1963) на станции ци топ а то логии
беспозвоночных в департаменте Гар (Ф р ан ц и я ) исследовал
у л ь тр атон ки е срезы из ж и р о в о го тела больных личинок хруща под
электронным микроскопом и отметил сходство этих включений с осп ен ным
вирусом. Во второй половине 60-х годов было установлено, что
подобный вирус встречается у зимней пяденицы (O p e ro p h th e ra
b rum a ta L .), У к омара-дергун а (Cainptocliironomus te n ta n s F a b r .) .
К середине 70-х годов вирус оспы насекомых был описан у 17 видов,
п рин ад леж ащ и х к четырем отрядам, весьма отдаленным др у г от д р у г а
в систематическом отношении: жесткокрылым, чешуекрылым, д в у крылым
и прямокрылым. В отряде чешуекрылых вирус оспы п о р аж ал
широкий спектр семейств: пядениц, медведиц, совок, мешочниц,
листоверток, древоточцев. Оспенный вирус насекомых получил родовое
наименование эн том оп о кс ви р у с.
Энтомогюксвирус п о р аж ае т личиночную стадию насекомых, но
при зараж ении сублетальными дозами они у сп е в аю т п р ев р ати т ь ся
в к у к о л к у , после чего погибают. Внешне больные личинки х а р а к т е ризуются
потерей нормальной упругости тела, пчбелением, р а зж и жением
тканей — призн аками , похожими па заб о л ев ан и е гусениц
шелкопряда ж ел тухой . Вирус л о кали зу е т ся в ц и топ л а зм е клеток ж и р о вого
тела, а у некотрых видов насекомых — с гемоцитах. В световом
микроскопе на окрашенных гистологических срезах через п о р аж енны е
участки тканей видны дв а типа включений. Веретеновидпые или ромбовидные
включения имеют вид оптически плотной гомогенной массы;
они постепенно увеличиваются в размерах. Яйцевидные или о в ал ьны е
образования — овоиды варьируют по величине ог н ескол ьки х м икрометров
до 20 и более. Веретеновидные включения явл яю т ся их п р едшественниками,
они значительно мельче н окрашиваются обычными
анилиновыми красками , состоят
из бел ка и имеют п аракрис талли-
ческую с тр у к ту р у ; по этим особенностям
они более похожи на п о ли эдры,
чем на включения оспенного
ви рус а позвоночных.
В овоиде на ультратонких срезах
через эти включения под электронным
микроскопом можно видеть
вирионов. По своему виду и строению
они похожи на вирионов вируса
осповакцины и натуральной
оспы человека. В центральной части
яйцевидных телец расположена
плотная сердцевина в форме параллелепипеда
с закругленными краями
(рис. 70); это нуклеоид вириона,
содержащий макромолекулу дву-
ннтчатон ДНК. У разных видов
насекомых размеры вириона варьируют
от 0,15 до 0,4 мкм в длину и
от 0,16 до 0,25 мкм в ширину;более

к р уп ны е встречаются у ж у к о в , более мелкие — у к омаров. У п о л ностью
сформированного, зрелого вириона сердцевина, со д ерж ащ а я
нуклеиновую кислоту, заключена в многослойную липопротеиновую
к ап су л у , окруженную волнистой шероховатой мембраной. В отличие
от размножения в к у л ь ту р е клеток вируса оспы позвоночных р еп р о д
у к ц и я энтомопоксвируса в теле искусственно зар аж ен н о го н а с ек о мого
протекает не синхронно, и в к л е тк ах одновреуенно н а б л к д ются
все стадии формирования нового поколения.
В зар аж ен ны х к ле тк ах тканей зимней пяденицы в н ач ал ьн ой
стадии репликации ви рус а в вирогенной области цитоплазмы п о я в л
яются отдельные группы мелких зерен. Эти частицы собираются
в плотные массы, которые дел я тс я потом на пучки мелких и гл . Из них
разрас таю т ся веретеновидные и ромбовидные в ключения. По мере
роста они постепенно принимают овальную форму и утрачивают сп о собность
ок раш и ва ться гистологическими к р аскам и . Овальны е т ел а
пред ст авляю т собой конечную стадию развития вирус а. Обычно в
к л е тк е образуется один к рупный овоид, но в к ле тк ах тканей комара-
д о л гу н н а таки х включений может обра зова ть ся неско л ько и в каждом
'‘ крупном овоиде содержится много вирионов.
Цитопатическое действие ви рус а оспы насекомых в основном х а р
ак т е р и зу е т ся исчезновением в цитоплазме клеток жироЕого тела
к ап ел ь ж и р а и приобретением ею в конце концов пенистой стр у кту ры ;
патол огич еских изменений яд р а клеток не отмечается. После з а в е р шения
формирования овоидов о к куп и р о ван н ая вирусом к ле тк а погибает.
Жи ровое тело и общая полость заполняются мириадами овоидных
вк лю чен и й , которые у части насекомых слишком малы, чтобы р а с смотреть
их в световом микроскопе.
Список поражаемых этим вирусом семейств насекомых невелик,
н о он х ар ак тери зу е тс я достаточно широким в систематическом отношении
составом, что позвол яе т п р едполагать возможность дал ьн ейш и х
встреч с ним, в том числе среди чешуекрылых. Его специфичность
н осит довол ьно широкий групповой х ар ак т ер , п роявляющ и й с я вне
в с я к о й св язи с филогенетической близостью поражаемых видов. Т у товый
ш ел к оп р яд удавалось з а р а зи т ь некоторыми из них. Имеется
ли у него собственный вид эн том о п о к с в и р у с а— достоверных сведений
пока нет. Однако у шелководов нет о снований не п р о я в л я т ь к нему
интереса, так к а к со дн я открытия этого вируса у насекомых прошло
н е много времени и изуч ение его п р о д о лж а е т с я .
Вирус ден сон ук леоэа . Возбудитель этого заболевания насекомых
относится к парвовирусам. Парвовирусы достоверно известны у млекопитающих,
где их типовым видом я в л я е т с я P a rv o v iru s r a l t i K ilh am—
л атентный крысиный ви рус . У насекомых парвовирус представлен
вирусом денсонуклеоэа (ВДН ), который вызывает болезнь «плотных
ядер» (лат. densum — густой, плотный).
> Первое упоминание о подобных цитопатических п р и зн ак ах у н а секомых
относилось к болезни гусениц большой вощинной моли
(Мейнадье, 1964). Затем этот вирус у большой пчелиной моли (Ga ller
ia me ilo n e lla ) подробно описал Е . Ку р с так (1972). О к а зал о с ь , что
большое количество ден сон ук леозн ого вируса л е гк о может бы т ь

эк стра ги ров ан о из этих больных гусениц. Рекомендованный нм метод
выделения состоит из двух циклов дифференциального ц ен тр иф у ги р
о в ан и я , с промежуточной обработкой ферментами д л я удаления к л е точных
нуклеиновых кислот и последующим зональным цен триф уги рованием
в градиенте сахарозы, диализом и фильтрацией через мелко-
пористые фильтры.
ВДН — голый вирус без оболочки, сферический (изометрической
формы), весьма малых размеров (18—22 нм), икосаэдрической симметрии
(рис. 71). Содержит одпонитчатую макр омо л еку л у Д Н К с м о л е к
у л я р н о й массой о к оло 5 млн. Вследствие очень мелких размеров
вирионов, описание их тонкой структуры т р у д н о е уверенностью д е т а ли
зи р о в а ть . Вирионы некоторых парвовирусов млекопитающих имеют
32 капсомера, а денсонуклеозный вирус большой вощннной моли п р ед положительно
содержит 42 капсомера, что у к а зы в а е т на известные
различия в строении обеих групп вирусов.
ВДН устойчив к действию эфира и хлороформа, со х р ан я е т инфск-
цноиность при температуре 8 0 °С в течение 10 мин, а при н и зк и х
темп ературах (—7 0 °С) — в течение н е ск о л ь ки х лет. В высушенном
состоянии менее стоек. ВДН вызывает забол ев ание т а кж е гусениц
бабочки нимфалиды Ju n o n ia eoenia H b n . (Тннслен, Ло н гво р т , 1973).
Обн аружен он и у лабораторной популяции комара Aedes a e g y p ti
(Лебедева с соавторами, 1972). Ядра клеток ж и рового тела у п о р аж ен ного
вирусом насекомого увеличены и сод ерж ат плотные о б р а зо в ан и я
с положительной реакцией Фельгена. Вирус п о р аж а е т т а кж е ж у к о в
и перепончатокрылых насекомых.
Вирусы большой пчелиной моли и нимфалиды, по р е зу л ь т а т ам
электрофореза в 10%-ном полиакриламидном геле, х ар а к т ер и зую т с я
наличием в вирусном белке четырех полос, из которых д в е о к а з а л и с ь
идентичными. Серологически оба ви рус а о к а з а л и с ь близкими, но отличными
от пар в о ви р у са млекопитающих. П е р е х о д ВДН из кишечника
в гемолимфу не прослежен. С помощью иммунофлюоресценции и имму-
нопероксидазной техники показано, что ч ер е з 4—7 ч после з а р аж ен и я
антиген вируса может быть обнаружен в цитоплазме. Ч е р е з 8— 13 ч
при температуре 3 2 °С вирусный антиген п оявл я е тс я в я д р ах . П ри
эл ектронном микроскопировании о бн ар уж ен о , что к этом у времени
в плотной хроматиновой зоне ядра возникают первые вирионы. Они
продолжают р азм н ож ать ся , р азр уш ая ядерную оболочку. Под конец
вирионы зап о лн яю т всю к ле тк у .
ВДН очень контагиозен и убивает гусениц большой пчелиной моли
при 2 8 °С через 4—6 дней. В зараж ен н ой гусенице з ап а с гл и к о г е на
истощается, заметно увеличивается содержание в жировом тел е
мочевой кислоты, особенно если инфекция сл у чи л ас ь в раннем в о з расте.
Если гусеницу во время интенсивного роста з а р а зи т ь высокой
концентрацией вирус а, ее развитие о с т ан авли вае тс я . Е сли ж е з а р а зить
ее слабой дозой ви р у с а, о к у к л и в ан и е может н ас ту п и т ь , и и н фекция
распространится из личиночных тканей на разви в аю щ и е ся
имагиальные органы, включая половые железы самца и самки.
Сами половые к летки (гаметы) не п р о я вл яю т к аки х -ли б о п р и зн а ков
з а р аж ен и я . Т о л ьк о в редких сл у ч а я х гусеницы и к у к о л к и с внешними
признаками п оражения ВДН могут п р евратитьс я в имаго и потому
передача инфекции тр ан со в ари ал ьн о оказывается м ал о в ер о я т ной.
Некоторые авторы (Бётэр, 1973) допускают, что отдельные особи,
у которых отсутствуют цитопатические изменения, в состоянии о к а за
ть с я носителем ви рус а и передать его следующему потомству.
ВДН большой пчелиной моли высоко сп ец и али зи ров ан и не п о р а ж
а е т д аж е близкородственные виды насекомых. Если ви рус , п о р а жающий
бабочек, впрыснуть личинке майского ж у к а ,о н со х р ан и тс я
в ней до 30 д н ей , но при этом с восьмого дн я п о сл е з а р аж ен и я
н ас тупа ет прогрессирующая убыль его в теле этого насекомого.
Вместе с тем В Д Н бабочки-юнонии значительно менее специфичен.
В опытах ск а рм л и в ан и я этот вирус л е гк о з а р аж а л гусениц к р ап и в ницы
(Aglais u rtic a e L .). Разм н ожи вш и с ь в эти х гусен и ц ах, вирус
о к а зал с я зар ази тел ьны м дл я капустной совки (Mamestra b rassica e L .),
непарного ш ел к оп р яда (L ym a n tria d isp a r L.) и тутового шелк опряда
(Bombyx mori L .); но он не инфекционен дл я капустницы (P ie ris
brassica e L.) и са турнид (P h ilo s am ia S p p .). Он не з а р аж а е т т а кж е
гусениц большой пчелиной моли, видимо, потому, что относится к
другом у виду или разновидности вирус а, в отличие от В Д Н , п о р а жающего
большую пчелиную моль.
Симидзу в 1968 г. выделил из гусениц тутового ш ел к оп р яда , п о р а женных
типичной фляшерией в к р е с т ь ян ски х хозяйс твах г. И н а
(префектура Н а ган о , Яп он и я ) ви рус , который он н а зв ал Ина-изолят
(1974). Кавасе и Сеок Куон К ан г (1976) получили электронные м и кр о фотографии
этого сферического вируса с диаметром вирионов 25 нм
(по другим данным — 21 нм). В отличие от ви рус а инфекционной ф л я -
шерпи, со д ерж ащ е го однонитчатую РН К (К ав а с е и д р ., 1974), у ви р
у с а И н а -и зо л я т о к а з а л а с ь однонитчатая Д Н К (К ав а с е и Кё, 1976).
Исследования нуклеиновых ки сл от этого ви рус а и соп о с т а вл ен и е
полученных р езу ль та то в п о к а з а ли , что молярные соотношения п у р и новых
и пиримидиновых оснований в н у к л ео ти д ах у И н а -и зо л я т а
и ви рус а денсонукл еоэа близки или даж е тождественны.
Ватанабе и др . (1976) описали ьистодогическую к а р ти н у этого
фляшериеподобного заболевания у ту т о в о го ш ел к о п р яд а , к о то р а я
о к а з а л а с ь тождественной той, которую вызывает у большой пчелиной
моли вирус ден сон ук леоэа . Д л я радиографии пораженной вирусом
тк ан и и споль зовали уридин и тимин, которые были мечены р ад и о а к тивным
изотопом водорода (Н 3). Установлено, что ви р у с р а зм н ож а ется
в эпителии средней кишки шелковичных червей, что синтез Д Н К
во время размножения вируса наблюдается преимущественно в я д р а х
п ораженных вирусом цилиндрических, а н е бокаловидных к л е то к .
В нач ал е п ораж ения эпителиальных клеток п ри зн аки ден со н у к л ео э а
то л ь к о частично различимы в клеточных я д р ах . В последующей с т а дии
болезни пораженные клетки отторгаются и вытесняются в просвет
к ишечн и к а. Одновременно с этим наблюдается увеличение колич ества
бок алови дных к ле то к . В этом процессе освобождения и нф и ц и р о в ан ного
эпителия от клеток-вирусоносительниц усматривают п р о я вл ен и е
защитной реакции организма насекомого. Вирус не образует в к лю ч е ний
в п о р аж ен ны х к ле тк ах , которые можно было бы р азли чи ть с помощью
светового микроскопа.
Маэда, Ватанабе и д р . (1977) осуществили тщател ьную очистку
ви р у с а И н а -и зо л я т . Среднюю киш к у зар аж ен н ой гусеницы гомоге-
н езировали в буфере и гомогенат центрифугировали при 3 ООО об'мин
в течение 10 мин. Затем дв аж ды п роводи л ась обработка ф то р у гл ер о -
дом с последующим центрифугированием. В заключение ц ен т р иф у ги рование
проводилось в 50%-ном растворе сах ар о зы при 65 тыс. об м и н ,
в течение 3 ч, центрифугат сусп ен зи ров али в буфере и ф р а ки и о и и р э
в а л и в гр ад и ен т е п л отн ос ти р а с т в о р о в 10— 4 0% -ной с а х а р о зы . В
р е а к ц и и с д иф ф у зи ей в г ел е по О у х л ер л о и н ан т и сы в о р о т к а к о ч и щ
ен н ом у ан ти ген у И н а -и з о л я т а р е а г и р о в а л а , к р ом е с о б с т в ен н о го
а н т и г е н а , с ан ти ген ом м ал о го ви р у с а ф л яш е р и и S FV ш т ам м а
М ац у и , что го в о р и т о н али чи и у них к ак и х -т о о бщ и х д е т е р м и н
ан т о в , но не р е а г и р о в а л а с ан ти ген ом в и р у с а и нф екц и он н ой
ф л яш е р и и FV. В а т а н а б е счи та ет , что И н а -и з о л я т по б о л е зн е т в о р ным
с в ой с тв ам и хим и ч еским х а р а к т е р и с т и к ам очен ь п охож па
д ен со н у к л ео зиы й ви р у с гусен и ц бол ьш ой п чели н ой моли.
К а н г и К а в а с е (1978) и с с л ед о в а л и н е к о то ры е с в о й с т в а б е л к а
к ап си д а «ф л яш е р и й н о го ви р у с а И н а» . П р о т еи н о чищ ен н о го в и р
у са ф р а к ц и о н и р о в а л и с п ом ощью э л е к т р о ф о р е з а в п о л и а к р и л а ми
дн ом гел е; ам и н о к и сл о тны й с о с т а в о п р е д е л я л и на ам и н о к и с л
о тн ом а н а л и з а т о р е . В ы я в л ен о д в а п о ли п еп ти д ны х к ом п о н ен т а
в б е л к е к ап си д а э то го в и р у с а , у с л о в н о о б о зн а ч ен ны х к а к п ервы й
и второй п оли п еп ти ды . М о л е к у л я р н а я м а с с а п ер в о го 55 500, в т о р
о го — 45 500. П ер вы й п о л и п еп ти д я в л я е т с я основной ч а с т ью б е л к
а к ап си д а это го ви р у с а и с о с т а в л я е т 80% о т всей м а с сы в и р у с ного
п р о теи н а . Г и д р о л и з б е л к а к ап си д а п о зво ли л у с т ан о в и т ь н а л
и ч и е 17 ам и н о ки сл о т , со с т а в к о то ры х о к а з а л с я ан а л о ги ч ны м
н ай д ен н ом у у р я д а д р у ги х ви р у с о в н а с ек ом ы х .
С. К. Кан г с соавторами (1978) и зу чи ли у предварител ьно тщ а т
ел ьн о очищенного вируса И н а -и зо л я т некоторые свойства его н у к леиновой
кислоты. С помощью электронного микроскопа установлено,
что вирионы представляют собой сферические тела диаметром о к о л о
20 нм (близко к предыдущим цифрам), капсомер кубического типа,
симметрия икосаэдрического с тр о ен и я . Седиментационный коэффициент
100. Из очищенных вирионов эк стр а ги р о в али нуклеиновые
кислоты в виде порошка и фиброзной массы; тот и другой д али положи тельную
реакцию с дифениламином. Н а основании формальдегидной
реакции и окраски препарата акридиноранжем выяснено, что ви р у с ный
геном у интактного вируса представлен однонитчатой Д Н К ,
что делае т его похожим на денсонуклеозный или на адено-ассоции-
рованнын вирус.
Ватанабе и Маэда (1978), р уководс твуя сь тем, что И н а -и зо л я т
отличается от фляшерийных вирусов наличием Д Н К , а не Р Н К , серологическими
и цигопатическими особенностями — уплотненностью
яд ер кле ток, а т а кж е сходством с денсон у клеозом гусениц большой
пчелиной моли и д р у ги х насекомых, сочли вызываемые им п о р аж ен и я
за самостоятельный вид инфекции. В соответствии с международной
классификацией вирус И н а -и зо л я т был отнесен к семейству парво-
вирусов, к роду денсонуклеозны х вирусов. Так к ак он серологически
отличается от вирусов денсонукл еоэа д р у ги х насекомых, было п р ед л
ожено обозначать его к ак денсон уклеозный вирус тутового ш ел к о п
р яд а , а вызываемую им болезнь — денсонуклеозом этого насекомого.
В шелководческих х озяй с твах префектуры Н аган о (Япония) В а т а набе
и Симнзу (1980^ обнаружили постоянное, умеренное очаговое,
энзоотическое поражение выкормок денсон уклеозом. Первоис точником
этих энзоотий о к а з а л а с ь тутовая огневка (Glyphodes p y lo a lis).
В годы обильного заселения плантаций огневкой она пораж ае тся ден-
сонуклеозом, вирус заносится с листьями шелковицы на вы к орм ки ,
за р аж а е т гусениц и сохран я е тся в пыли червоводен. Р а зви ти е эн зо о ти ческого
п оражения выкормок в эпизоотию денсонуклеоэа сдерж и ва ется
распространением в префектуре слабовосприимчивых пород к этому
ви русу. В префектуре Сайтама, расположенной н есколько юго-восточнее
от Наган о, вирус денсонуклеоэа не был обнаружен у огн евки
на тутовых п л ан т ац и ях , на выкормках шелковичных червей и в пыли
червоводен.
Ватанабе и Маэда сопоставили генетически обусловленную устой чивость
дв у х пород тутового шел к опряда к вирусу ден сон ук леоэа при
зар аж ен и и гусениц через кишечник. Сам по себе смертельный исход
экспериментального за р аж ен и я не р аск ры вае т х ар а к т ер а противовирусной
защиты насекомого. Они разли ч аю т рефракторный (фр. о т клоняющий)
тип устойчивости, когда организм защищен от в т о рж ен и я
вируса, и устойчивость типа резистентности (сопротивляемости),
когда организм тутового шелк опряда не может избежать з а р аж ен и я ,
но способен выжить, борясь с проннкшим в него вирусом. Тик, иммунитет
к фл яш ери кн ом у вирусу — следствие резистентности, д о с т и г а е мой
заменой пораженных клеток кишечного эпителия здоровыми,
а к ядерному и цитоплазматическому полиэдрозам п р о явл я е тс я ре-
ф р акто рн о с ть , в отличие от вируса ф л яш ер и и , который способен з а р а ж
а т ь д аж е относительно иммунные породы. Но они оказывают со п р о тивление
развитию болезни и при достаточной силе механизма иммунитета
могут добивать ся самоизлечения. Нак он ец , самоизлечение североамериканской
совки от цитопла зма тиче ского полиэдроза обе сп ечивается
двумя механизмами: и н тен си вн а я реген ераци я эп и тели я
(резистентность) и появление рефракторностн, устойчивости его к повторному
инфицированию (Ямагути, 1976).
В основе иммунитета тутового ш ел к оп р яд а к денсон у к л ео зу л е ж
и т р еф р ак то рн о ст ь, в большей или меньшей степени препя тствующая
за р аж ен ию гусеницы вирусом. Стойкость в недопущении инвазии
(вторж ения) определяется наследственно обуслопленным отсутствием
у а т ак о в ан ны х вирусом клеток ш елк оп ряда рецепторов, обеспечивающих
п р оникнов ение вирионов в к ле тк у , и, быть может, отсутствие н еобходимого
обеспечения последующей деятельности вируса со стороны
ферментативного ап п ар ат а зараж аем ой к л е тки .
Одну из наиболее устойчивых пород ш ел к о п р яд а , отн о сящ и х ся
к китайской группе С-124, Ватанабе и Маэда ср а вн и в али с наиболее
восприимчивой к вирусу Дёйсонук'лёоза породой, принадлежащей
к японской гр уп п е N-124. Иммунитет первой был столь силен, что г у сеницы
почти поголовно избежали за р аж ен и я через кишечник. Авторы
провели скрещив ание той и другой породы в разных к ом би н ац и ях ,
в том числе с получением тригибридов. В итоге выяснилось, что устойчивость
С -124 не наследуется при гибридизации, так к ак этот п ри зн
а к кон тр о ли р у ется рецессивным главным геном (олигогеном), который
действует самостоятельно и л е гк о вы я вл я е т с я при ск рещив ании;
это п озволя е т использовать племенную работу к ак обл асть н аи б олее
эффективных методов борьбы с этим забол ев анием.
Вопросы для самопроверки
1. Какие используются методы для выявления и идентификации вирусов?
2. Какие признаки используют для систематизации вирусов?
3. Как протекает процесс заражения шелковичных черней вирусом желтухи?
4. К чему сводится взаимоотношение вируса с поражаемой им клеткой и из
каких этапов складывается процесс воспроизводства (размножения) вируса в клетке?
5. Каковы структурно-морфологические особенности вириона и полиэдров вируса
ядерного полиэдроза?
6. Каковы особенности латентного (скрытого) вирусоносительства у насекомых?
7. Каковы отличительные особенности внешнего проявления и течения желтухи
у шелковичных червей?
8. В чем характерные особенности вируса цитоплазматического полиэдроза
и вызываемого им заболевания, его сходство и различия с ядерным полиэдрозом
кишечника, вызванного вирусом, содержащим РНК?
9. Чем характеризуется группа фляшерийных вирусов и что представляют собой
вызываемые ими заболевания?
10. Чем характеризуется вирус денсонуклеоэа и вызываемое им поражение гусениц
тутового шелкопряда?