3 .6 . Фляшерия , вызываемая вирусами

Характеристика фляшерии вирусного происхож дения. Еще А. Пайо
в конце 20-х годов предположил, что способность бактерий у ч а ствовать
в р а зви ти и заболевания тутового шелкопряда фляшерией
обусловлена особым вирусом. В 1960 г. Ямадзаки с сотрудниками
тщательно исследовали больных гусениц в одном из старых эндемических
очагов ф л яш е р и и в Японии, в крестьянских хозяйствах префектуры
Нагано. З д о р о вы м гусеницам через рот вводили фи л ьтрат
р астертых в порошок тр у п о в , возникала ф л яш ери я , что, по их мнению,
свидетельствовало о существовании особого фляшерийного ви р у с а,
вызывающего инфекционную форму этого забо л ев ан и я . Затем К. А ид-
з а в а и др. (1964) с помощью ряда вирусологических методов исследован
и я подтвердили, что инфекционная ф л яш ери я шелкопряда вызывае
т ся ссобым вирусом IFV .
Первоначальный способ диагностики посредством зараж ен и я гусениц
супернатантом водной эмульсии из растертых труп ов о к а з а л с я
трудоемким и недостаточно точным. Но он позволил решить многие,
чисто практич еские вопросы в первом приближении. З а последующие
п о л то р а дс ся тка лет на базе современных методов исследования удал
ось многое узнать к ак о самом вирусе, т а к и о вызываемом им з а б о л
ев ан и и . Бы л о обнаружено, что изучаемый вирус инфекционной
фляшерии IFV Аидзавы (1964), который явл я е т с я синонимом ф л я шери
й н ого вируса FV Ямадзаки (1960), не одинок, что существует
р я д дру ги х вирусов, вызывающих гибель гусениц тутового шелкопряда
ф л яш ери йн о го типа (так называемый Ғ-тип заболев ания), в том числе
более мелкие вирусы, отличающиеся болезнетворными свойствами, —
малые вирусы фляшерии SFV (Химео, 1974). Тщательный учет з а б о л е ваемости
гусениц шелкопряда на выкормках в Японии позволил
у становить, что за десятилетие (1958— 1965 гг.) на долю фляшерии
приходилось от 65 до 78% гибели гусениц от инфекционных заболеваний.
Не мудрено, что через 10 лет после публикации Аидзавы,
в 1976 г. Ва танабе в обзоре, пссвященном этой болезни, привел список
199 цитируемых им работ о вирусной фляшерии; некоторые из них
упоминаются нами.
Симптомы заболев ан и я вирусной инфекционной фляшерии повторяют
классическое описание мертвенности и могут широко вар ьи ровать:
от торм ожения р азви ти я до острых кишечных явлений и шокового
сос тояния . Р азн ооб рази е признаков болезни и картины гибели
гусениц определяются видовым составом сопутствующих бактерий
и интенсивностью их соучастия в патогенезе забол ев ания. Все это д о казано
экспериментально с применением стерильных условий воспит
а н и я г у с е н и ц на искусственном корме и заражением их в различных
в ари ан тах ви р у сом фляшерии и бактериями из набора видов, уча ст вующих
в натуральных эпизоотиях. Бактерии способствуют во зн и кн о вению
ф ляшерии, реали зуя заболев ание д аж е при субинфекционных
д о зах вируса. Самые активные помощники, помимо высокотоксичной
дл я насекомых группы бактерии тюрингиензис, — энтерококки ш ел копряда.
Длительность инкубационного периода (5— 12 дней) зависит
от возраста гусениц, количества вируса, участия бактерий и д р у ги х
условий. Гусеницы младших возрастов одинаково восприимчивы
и легко заб о л ев аю т вирусной фляшерией, в четвертом возрасте восприимчивость
сн иж а е т с я , в пятом они заметно устойчивее к заболеванию,
но д аж е к у ко л к а при ее инокуляции не защищена в полной мере
от з а р аж е н и я вирусом. Зараж ен ные в пятом возрасте гусеницы не успевают
з а б о л е т ь , нормально о к у к л и в аю т с я , превращаются в бабочку.
Вышедшие из отложенной такой бабочкой грены гусеницы в большинстве
своем, будучи внешне здоровыми, явл яю т ся вирусоносителями:
видимо, фляшерийный вирус от к укол ок и бабочек может пер еда в а ть с я
следующему поколению в форме латентной инфекции. Возможность
экзогенного за р аж ен и я вирусной фляшерией приурочена к личиночной
стадии шелкопряда.
Вирус инфекционной ф л яш ери и IFV. Аидзава (1972) получил
препарат вируса высокой степени очистки в резуль та те у л ь тр ац ен тр и фугирования
в градиенте хлористого цезия. Позже и с с л ед о в а т ел и -
использовали ультрацентрифугирование
в градиенте плотности 1 0—40%-
ной сахарозы с последующим применением
ряда методов о чи с тки вируса.
Диаметр вирионов 25—30 нм, форма
сферическая (рис. 66), константа с е диментации
183 S. Н у кл еи н о в ая ки слота
вируса — однонитчатая Р Н К .
Согласно сообщению Кава се и д р .
(1980), молекулярная масса Р Н К вируса
фляшерии 2,4 • 10е дал ьтон и
содержание ее в вир ионах сос тавля ет
2 8 ,5% . Размеры вирионов о т 24 до 30
нм, при значительном преобладании
количества их с величиной 2 6—28 нм.
В вириоиах содержится 4 стр у кту рны х протеина, с м о л еку л ярн ой
массой у протеина В ^ — 31—32 • 103, у ВП2 = 4 1—42 ■ 103, у
ВП Я = 49 • 103 и у В П 4 = 68—69 • 103. Протеин В ^ — основной
п р о теи н капсида и составляет 70% от массы вириона.

И н а к т и в а ц и я ви р у с а при к ом н а тн о й т ем п е р а т у р е н а с т у п а е т ч е р
е з 450 д н ей ; при х р ан ен и и в х о л о д и л ь н и к е (— 18°С) п а т о г ен н о с т ь
с о х р а н я е т с я и по истечении 500 д н ей . В п р о ц е с с е т е рм и ч е с к о й о б р
а б о т к и и н а к т и в а ц и я д о с ти г а е т с я при 90— 100°С ч е р е з 5— 10 мин,
п ри 70°С — ч е р е з 20 мин, при 60°С — ч ер е з н е с к о л ь к о ч а со в , а п р и
50°С — п о лн о с т ью не о б е сп е ч и в а е т с я д а ж е 3 0 -ч а со вы м п р о г р е в а н и ем.
Э к сп о зи ц и я д л я и н ак ти в ац и и у л ь т р аф и о л е т о вы м и л у ч ам и к о л
е б л е т с я в п р е д е л а х от 10 мин д о 10 ч и з а в и си т от м ощнос ти
и сточн и к а и зл у ч ен и я , р а с с т о я н и я от него, конси ст ен ц и и ж и д к о сти,
в к о то р ой в зв еш ен ви р у с , и др. Г ам м а -л у ч и (С о 60) п р а к ти ч е с к и
не в л и яю т на и нф екц и он н о с ть в и р у с а . Д ей с т в и е р а д и ац и и в тече-
ни 20 ч при pH ср еды от 3 до 12 не и зм ен я е т инфекц и он н ос ти , но
при д а л ьн е йш ем увели ч ен и и ки сл о тн о с ти (pH 2) ви р у с в з н а ч и т
ел ьн о й с т еп ен и и н ак ти в и р у е т с я .
Фляшерийный вирус тутового ш ел копряда непатогенен д л я шел копрядов
ямамай, индийского ди к ого (дубового), айлантового, клещевинного
и к ольча того. Инфекционность вируса оценивали обычно
с помощью биологической пробы на тутовом шелк опряде заражением
через рот или инъекцией в общую полость. Затем о патогенности стали
су д и ть по к ар ти н е размножения вируса в к л е тк ах кишечного эпител
и я , к о то р а я и зу ч ал а с ь с помощью электронного микроскопа или
флюоресцирующих антител . Выделенные из больных гусениц ту то вого
ш ел к оп р яда в р яд е префектур Японии семь штаммов вируса
фл яш ери и о к а за ли с ь по результатам реакции нейтрализации серологически
близкими или идентичными. Тем не менее исследователям
п р ед с т авл я е тс я вероятной вариабельность фляшерийного вируса,
в том числе тех его линий, которые, быть может, ведут свое начало от
ди ки х насекомых.
Вирус инфекционной фляшерии Аидзавы, он ж е фляшерийный
вирус Ям ад заки FV, отличается высокой термостойкостью: он выд
е рж и в а е т н агр е в ан и е при 6 0 ° С в течение н ескол ьки х часов. Этот
п р и зн ак х ар а к т ер ен д л я реовирусов, но фл яшерийны й вирус не
может быть причислен к ним из-за более к руп ных размеров вирионов
у реовирусов (60 нм) и, что более существенно, из-за н али чи я у них
двунитчатой, а не однонитчатой, к ак у F V, Р Н К . Энтеровирусы, к
которым еще недавно причисляли (в качестве особого серотипа)
реовирусы, имеют однонитчатую Р Н К и вирионы меньшего р азм ер а.
К а в а с е и др . (1980) относят вирус фляшери и к группе пикорнави-
р у со в — более широкой систематической к ате го рии , включающей
в свой состав и энтеровирусы. Н азв ан и е «пикорна» образовано сочетанием
и т а л ь ян с к о го слова «пикколо» — малый и аб бреви а туры RNA —
р и б о н у к л еи н о в а я кислота (РН К ). Это самые малые РНК -ви р у сы (до
32 нм), в число которых входят и энтеровирусы (греч. энтерон — кишечник),
поражающие пищеварительный т р а к т многих животных,
в том числе насекомых. В качестве энтомопатогенов они вызывают
ц итоп а ти че ски е изменения к ле то к кишечника.
Патология вирусной фляшерии. Вирус ф ляшерии обнаружен пе
то л ь к о в эпителии средней кишки, но и в гемолимфе, шелкоотделительных
ж е л е з а х , жировом теле и к ле тк ах кожных покровов. Методом
флюоресцирующих антител установлено, что сначала поражается
эпителий кишечника, а затем гум о р ал ьн а я среда организма (тканев
а я жидкость , гемолимфа) разносит вирус по д р у гим органам и тк ан ям.
Сначала пораж аю т ся бокаловидные кле тки переднего участка средней
кишки (рис. 67). За тем постепенно з а р аж а е т с я задний уча сток, где
преимущественно расп о л ож ены цилиндрические к л е тки . Специфическая
флюоресценция, у к а зывающая
на присутствие
вируса, си л ьн о заметна в
цитоплазме бокаловидных
клеток и очень слабо в цитоплазме
цилиндрических
кле ток и притом тол ько
некоторых. У пораженной
бокаловидной клетки изменяется
внешний вид цитоплазмы,
уменьшается коли чество
митохондрий, клет-

ли н дри ч ески х кле ток в последней стадии поражения наблюдает
ся гипертрофия яд р а и гр ан у л яц и я к ариоплазмы, а в цитоплазме
часто о бр а зую тс я базофильные тельца. Р адиоавтографирование эпит
е л и я средней кишки с помощью тимидина и уридина, меченых изотопом
водорода (Н 3), п о к а зал о , что по мере прогрессирования заб о л е ван
и я синтез Р Н К в я д р ах бокаловидных кле ток усиливается, а затем
Р Н К начинает н ак ап ли в а ть ся в их цитоплазме. Синтез Р Н К наблюдае
т ся т а кж е в я д р ах цилиндрических кле ток, где в отличие от бокаловидных
син т ези руе тся и Д Н К . 3 начальной стадии з а р аж ен и я в цитоплазме
бокаловидных кле ток под электронным микроскопом обнаружено
множество сферических полых телец с однослойной оболочкой
диаметром 100—400 нм, во к р у г которых располагаются вирионы.
По мерз их нак оп л ен и я о р ган еллы в цитоплазме видоизменяются
и исчезают. Эти сферические тельца представляют собой продукт
дегенеративных изменений в бокаловидных к ле тк ах . Если зар аж ен н ая
вирусом гусеница о к у к л и в а е т с я , эпителий средней кишки обновляется,
личиночные клетки накапливаются в сифоноглифе, а эпителий
кншечника к у к о л ки п р о я вл я е т высокую степень невосприимчивости
к вирусу и потому ни она, ни бабочка, к ак правило, не заболевают.
Отмечены ред ки е сл уч аи за р аж ен и я кишечного эп и тели я к у ко л ки
вирусом и обра зование в цптоплазме клеток специфических дл я этой
инфекции шаровидных тел ец ; случ аи эти приписываются вторичному
зараж ению вирусом, находящимся в сифоноглифе.
Из патофизиологических явлений упоминается низкий показатель
преломления гуморальной жидкости у больных гусениц и снижение
сод ерж ан и я в ней протеина по мере прогрессирования болезни. Изучалась
к р и в ая р а зм н ож ен и я вируса в организме гусеницы на основании
изменения Л Д 50 и в биологических п робах на здоровых насекомых;
установлено, к а к у д р у г и х вирусов, четыре фазы его ж и зн ед е я т е л ь ности:
сокращение количества первоначально ц и р к у л и р ую щ е го ин
нииы тутового шелкопряда: рует, приобретает шаровидную
форму и выт алкиваетс
я в сифоноглиф средней
кишки (пространство между
эпителием и перитро-
фической мембраной). У ци-
КМ — кольцевые и ПМ — продольные мышцы; Т — по*
перечный срез через трахею; КР—регенеративные клетки
эпителия; ЦК — цилиндрические и БҚ — бокаловидные
клотки эпителия; через рабдориум этих клеток
(Қ) выступают капельки пищеварительного сока (С);
ОПМ — перитрофическая мембрана.
т актного вируса, эклипс -ф аза , р еп л и к ац и я , р ец и р к у л яц и я разм н о жившегося
вируса. Скорость размножения вируса максимальна при
темп ературе 25—3 0 °С; при 16е С она замедл ена и сос тавл я ет 1/5 от
наибольшей величины.
Известны случаи естественной и экспериментальной смешанной
инфекции вирусной фляшерии и ц и топлазматического полиэдроза ,
а т а кж е тройной — с участием ядерного полиэдроза. Фляшерийный
вирус размн ож ае тся в бокаловидных кле тк ах, а вирус ц и то п л а зм а ти ческого
полиэдроза — в цилиндрических. Смешанная инфекция ускор
яет развитие болезни и гибель гусениц.
Д и агн о с ти ка . У вирусной инфекционной фляшерии нет внешних
признаков, позволяющих отличить ее от д р у ги х забо л ев ан и й , приводящих
к фл яшерийному виду больных и умирающих гусениц.
Предложен метод биологической пробы (Аидзава и д р ., 1964). Отстоявшийся
суп ерн ат ан т водной взвеси из растертой средней кишки бол ь ного
насекомого вводят через рот гусеницам младшего возраста, чтобы
определить его инфекционность. Эта проба не всегда да ет удовлетворительные
р е зу л ь т а ты из-за р яд а условий, от которых зави си т ее
достов ерность. При гистохимической диагностике (Ивасита, Кудаиэ,
1967) на м азках из эп и т ели я средней кишки устанавливают присутстви
е в ц и линдрич еских кле тк ах сферических телец, которые хорошо
окрашиваются метилгрюн-пиронином по Унна-Папенгейму. Метод
не пригоден д л я ранней диагностики, так к ак упомянутые обр а зо ван и я
появляются в последней стадии болезни и к тому же не всегда обнар
ужив аются. Н аи б о л ее надежный результат дают серологические
р е акц и и , в том числе двойная диффузия в а гар е по Оухтерлони и имун-
ноэлектрофорез с противофляшерийной антисывороткой. И споль зование
антител с флюоресцирующими красителями позволило проводить
диагностиров ание через 48—96 ч после зар аж ен и я при минимальных
дозах вируса, а т а кж е по гниющим трупам гусениц. Методы серол
огической преципитации в геле и мечение вируса флюоресцирующими
антителами наиболее пригодны д л я ранней диагностики фляшерии
и отлич аются высокой точностью (Ни н ахара и д р ., 1973, 197.5'.
Эпизоотология вирусной фляшерии. Когда гусеницы, зар аж ен ны е
вирусом фляшерии, попадают в партию зд оровых, среди них п о я в л я ются
заболев ающие, число которых быстро возрастает, и они становятся
источником т а к называемой вторичной инфекции. Один из основных
источников распространения вируса — экскременты больных
гусениц. Фляшерийный вирус можно обнаружить в экскрементах
через неско л ько часов пссле искусственного зар аж ен и я гусениц. Поэтому
с эпизоотологической точки з [ с п и я з а р аж ен н а я подстилка на
выкормочной поверхности за сл ужи в ае т повышенного внимания, особенно
если на ней содержатся восприимчивые гусеницы младших возр
ас тов. Л и с т ь я шелковицы перед раздачей моют или опрыскиЕают
водой, чтобы они быстро не у в яд али . Р ед к а я смена подстилки
повышает опасность со стороны выкормочной поверхности.
На темпе р а зви ти я эпизоотии и на накоплении источника вторичной
инфекции в подстилке сказываются сезонные особенности. О с л а б ление
роли этого источника инфекции, который пополняется на п р о т я ж
ении всей вы к орм ки ,— достаточно т р у д н а я задача . Ц елесообразна
т ек ущ а я дезинфекция подстилки, а т а кж е поверхности тела самой
гусеницы; при смене подстилки необходима дезинфекция выкормоч-
ных ст ел л аж ей и помещения. Выбор обеззараживающих средств,
традиционно используемых шелководами, не вели к и не очень эффективен.
Фляшерийный вирус, содержащийся в экскрементах, трудно
инактивировать д аж е такими средствами, к а к прямое солнечное облучение
или с у х а я термообработка при 1 0 0 °С в течение 30 мин.
Остатки листьев и веток шелкозицы, подстилка, экскременты,
упавшие на пол в выкормочном помещении, трупы гусениц,— все
эти зараж ен ны е за время выкормки отходы могут стать источником
инфицирования гусениц, а испол ь зование их д л я кормления домашнего
скота или птиц представляет особую опасность, т а к к а к в кишечном
тр а к т е животных ви р у с не инактивируется и выводится н ар уж у . По
данным японских исследователей, инфекция распространяется т а кж е
при использовании отходов выкормки д л я удобрения тутовых план т аций.
Рассеиваясь при обработке почвы, вирус поднимается ветром
вместе с пылью и за гр я зн я е т поверхность листьев. Д л я самообеззара-
жи в ан и я т а к о го листа в естественной обстановке требуе тся 30 дней.
Если же экскременты остаются в поле не на солнце, инфекционность
вируса со х р ан я е тся д аж е по истечении этого ср о к а . В экскрементах,
зарытых в землю, вирус инактивируется примерно через год, а в компосте—
через восемь месяцев. Если зараж енные экскременты попали
в навоз или компост, вирус инактивируетс я во время р а зо гр е вания
нав о за, особенно при обработке известью, цианамидом к ал ьц и я ,
формалином и т. д. Известкование кислых почв, внесение золы и цианамида
к ал ьц и я , повышающие плодородие почв, заметно ускоряют и нактивацию
патогена.
Известна роль вредителей тутовых плантаций в переносе ими
вируса и за гр я зен и и листьев шелковицы. Отмечена возможность р а с пространения
вируса фляшерии вок руг гренажных предприятий
с чешуйками бабочек, а т а кж е комнатными мухами, сидевшими на т р у пах
ш ел к оп р яда , погибшего от этой болезни. Накоплению инфекции
способствуют позднеосенние выкормки шелковичных червей, после
которых вирус сохраняе тся до следующей весиы в пыли червоводен,
в ли стохран и лищ ах, в помещении д л я завивки коконов.
Пред ставляе т значительный интерес эндемический харак тер эпизоотий
вирусной фляшерии — повторяемость в течение р яд а л ет , о бу сл
овленная благоприятными эпизоотическими факторами, в том числе
природными. Обследование систематической заболеваемости вы к о рм о к
в префектуре Наган о (Япония), проводимое в течение р яд а л ет , пок
а за л о , что основными причинами гибели шелковичных червей, котор
а я соп р о в ож д ал ас ь типичными признаками мертвенности, оказались
ви р у сн ая ф л яш ери я и цитоплазматический полиэдроз.
Формированию эндемической очаговости этих заболеваний способствовал
занос инфекции в период младших возрастов. Поэтому,
по мнению Ямадзаки и д р . (1966), резуль таты проверки наличия в о з будителя
в червоводнях в младших возрастах должны быть о бя затель но
учтены при прогнозировании у р ож а я коконов. Танасу и Т ак ах а си
(1963) предложили метод обнаружения вируса фляшерии, основанный,
на добавлении к корму подопытных гусениц младших возрастов пыли
собранной в помещении выкормки с тем, чтобы установить степень
инфицированности о тдельных хозяйств в эндемическом очаге. П о л у ченные
таким образом результаты ок а зали с ь достаточно сопоставимыми
со статистическими сведениями о степени поражаемости фл яшерией
отдельных хо зяй с тв и с очаговым х арак тером появления заб о л е ваемости.
Формированию эндемической очаговости, помимо наличия з а р а женного
начала, благоприятствуют экологические факторы и их
в л и ян и е на уровень восприимчивости шелкопряда к заболеванию.
В одних районах встречаются обе вирусные инфекции, в других —
вирусная ф л яш ери я обн аружи в алас ь реже или отсутствовала сосссм.
Т а к , в зонах повышенных температур во зд у х а в период выкормки
чаще наблюдались цитоплазматический и ядерный полнэдрозы, а пе
ф л яш е р и я . Приторможенная и н к у б ац и я гр ены при 5 °С в течение од-
ного-десяти дней повышает восприимчивость к инфекции вышедших
гусениц, и тем сильнее, чем дольше это воздействие. Охл аж дение ж е
новорожденных гусениц, вышедших из нормально инкубированной
грены в течение 11 дней при 5 °С , не вли я е т на состояние их восприимчивости
к этому вирусу. Заболеваемости способствует кормление гусениц
первого-третьего возрастов жесткими листьями, росшими в услови
ях недостаточной освещенности солнцем, или значительное сокращение
нормы к о рмления ; особенно тако е в л и ян и е заметно на осенних
вык орм ках. Отрицательное действие условий питания в третьем-
пятом во зр а ст ах усиливается с повышением температуры (3 0 ° С)
и влажности воздуха (95%). Усиливают восприимчивость т а кж е э к с тр е мальные
температуры (2,5 или 5 0 °С ), недостаточная площадь выкормки,
толстый слой подстилки, п лохая в ен ти л яц и я , за гр я зн ен и е корма
ядохимикатами, а воздуха — вредными газообразными и пылевыми
частицами. Наблюдались случаи возникновения фляшерии при контакт
е гусениц с пропионовой кислотой, выделяемой из труп ов гусениц
тутового ш елк оп ряда .
Селекция шелкопряда на устойчивость к фляшерии. Наиболее р а ди
к альн ое средство в борьбе с вирусной фляшерией — селекция шелк
оп ряда на устойчивость к этому забол ев ан ию . Устойчивость к фля-
шерийному вирусу передается по наследству к а к рецессивный п р и зн а к ;
доминантным оказывается при зн ак восприимчивости. К ак правило,
ки тай ски е породы устойчивее японских.
Испытан провокационный метод отбора линий, устойчивых к ф л я -
шерийному вирусу: в условиях, бл а гоприя тствующих заболеванию,
гусениц з а р аж аю т вирусом и отбирают особей, оставшихся в живых;
отбор в течение пяти поколений п озволил получить линию, устойчивую
к фл яшерийному вирусу.
У устойчивых пород размножение вируса не приводит к появлению
за б о л е в ан и я . Иначе говоря, устойчивость п р о явл я е тс я не в предо
твращении з а р аж ен и я , а в повышенной выживаемости з ар аж ен ны х
гусениц. По мнению И н о у э (1974), эта разн и ц а в значительной степени
з а ви си т от того, н аско л ько быстро обра зуются бокаловидные кле тки
и р е г ен ер и р у е т пораженный эпителий. Исследовались процессы регенерации
эпителия кишечника, пораженного вирусом цитоплазматического
п оли эдроза , фляшерии и малого вируса, содержащего РН К .
а т а кж е последствия термотерапии вирусной инфекции (Иноуэ,
Миюгава, 1978). По-видимому, возможность регенерации вы я в л я е т с я
более четко, если в патогенезе вирусной фляшерии не принимают участия
бактерии, попадающие с кормом в кишечник. Установлено, что
гибель зар аж ен ны х гусениц, воспитываемых на искусственном корме
в стерильных условиях, наступает значительно позже, что, по мнению
исследователей, о бъ я сн я е тся сохраняющимся в этих условиях равн о весием
между разрушением бокаловидных клеток и регенеративными
процессами (К у р у су , Мацумото, 1974).
Малые фляшерийные вирусы. Вначал е п о л а г ал и , что возбудитель
вирусной фляшерии однотипен, пред ст авл я е т собой вирионы сферической
формы диаметром 26—28 нм, содержит рибонуклеиновую кислоту,
размн ож ае тся в бокаловидных к л е тк ах эп и т е ли я средней кишки
и о бр а зу е т шаровидные т е л ьц а в цилиндрических к л е т к а х . С того времени,
когда Ямазаки с соавторами (1960) впервые установили вирусную
природу инфекционной фляшерии — во зб у ди т ел ь этой болезни
FV стал п ривл екать к себе постоянное внимание.
Вскоре Аидзава (1964) сообщил, что состав патогена неоднороден
и о б р а зу е т две зоны в равновесном градиенте плотности хлористого
ц е зи я . Химено и др. (1974), з а р а зи в гусениц тутового шелкопряда
фляшерийным вирусом коллекционного происхождения, известного
как штамм С акаки , выделили помимо известного фляшерийного вируса
FV более мелкий. Диаметр его 22 нм, константа седиментации
S 134 (вместо S 180 у FV, содержащего РН К ). Авторы пришли к з а ключению,
что штамм этого вируса можно раздели т ь центрифугированием
в градиенте плотности 10—4 0%-ной с ах ар о зы на два типа инфекционных
частиц, разли ч ающ и хся по своим размерам: на ф л яш е рийный
вирус шелкопряда S FV i и S FV 2. Под электронным м икроскопом
видны их сферические вирионы, т. е. их капсиды построены по
одному из типов кубической симметрии.
Эти авторы исследовали на однородность т а кж е штамм Вадаямы,
который был в свое время признан идентичным со штаммом Сакаки
(Фунада и д р ., 1969), и убедились, что и в этом штамме содержатся два
описанных типа вирионов. При за р аж ен и и гусениц второго возраста
(более восприимчивых) и гусениц четвертого (менее восприимчивых),
воспитанных на искусственном корме и в ст ери л ьных условиях, оба
эти типа вирусов о к азали с ь инфекционными; в обоих сл у ч а ях разви ти
е зар аж ен ны х гусениц задерживалось , заболевание фляшерией
прогрессировало и гибель наступала на 7— 14-й день. Инфекционность
S F V i— основного, более к рупного вируса, была более сильной;
в младших возрастах эта разница вы р аж ал а с ь значительно слабее,
но в четвертом возрасте более мелкий S FV 2 не смог преодолеть возрастной
иммунитет шелковичных червей. Если во втором возрасте от S FV i
из 15 зараж ен ных гусениц погибли 14, а от S FV 2 из 19 погибли 18,
то в четвертом возрасте от SFV, в двух зар аж ен ны х партиях из 20
и 30 погибли соответственно одна и восемь гусениц, а от S FV 2 не
погибло НИ ОДНОЙ.
Исследование окрашенных гистологических препаратов (Иноуэ
и Аидзава, 1972) с использованием флюоресцирующих антисыворотск
к фляшерийному вирусу пок азало, что патоген предпочитает бок аловидные
клетки эпителия средней кишки. Седиментационный анализ
э к стр акт а из средней кишки и всего тела гусеницы выявил, что оба
вируса размножаются в эпителиальных клетках примерно одинаково
и только в последней стадии р азви ти я болезни более мелкий и менее
вирулентный накапливается в них в большем количестве. Ва танабе
(1967), исследуя синтез нуклеиновых кислот в эпителии гусениц с помощью
радиографического метода, отметил, что меченый изотопом
предшественник Р Н К включается в ядра обоих типов эпителиальных
клеток; хотя S FV 2 интенсивно синтезируется в эпителии, окончательно
не установлено, размножается ли он помимо бокаловидных в цилиндрических
кле тк ах. По данным серологических реакций нейтрализации
и двойной диффузии в геле, оба типа вирусных частиц, выделенных
Химено и др. (1974) из штамма Сакаки, имеют общие антигены и серо-
логически очень близки и потому степень их таксономической самостоятельности
неясна (К у р у су и д р ., 1975).
Ватанабе (1976) в обзоре вирусов фляшерийных забо л ев ан и й обозн
ачи л S F V 2 к ак штамм Химено. Вы сказаны т а кж е предположения,
что оба вируса явл яю т ся штаммами одного вида, но различного происхождения,
быть может, от разны х видов насекомых, и в разной ст е пени
адаптированы (приспособлены) к тутовому шел к оп р яду . Совместное
участие в смешанной инфекции и присутствие их в шгг.ммах
С акаки и Вадаямы п о сл уж и л о основанием д л я другого п р едп о л ож ения
о том, что S F V 2 «не вполне зр е л а я в инфекционном отношении,
н ед о р азви та я форма S F V I».
Мацуи (1973) из гусениц тутового ш ел к оп ряда , зар аж ен ны х штаммом
Сакаки в лабораторных условиях, выделил вирус со сф ерич ескими
вирионами, меньше обычного фляшерийного вируса FV, по размножающегося
в яд рах цилиндрических кле ток, а не бокаловидных,
к а к вирус Ямазаки FV. Клетки эти становятся «тучными», в я д р а х
возникают участки, густо окрашивающиеся по Фельгену и при и ссл едовании
под электронным микроскопом здесь видно образование в и рионов.
Ватанабе обозначил этот вирус к а к щгамм Мацуи.
Фурута (1973) з а р а зи л шелковичных червэн вирусом яд ер н о го
полиэдроза капустной и других совок и у заболеащ ix выделил ви р у с
со сферическими вирионами (В ЯП — палочковидный), несколько
мельче (17—23 нм) фляшерийных, выделенные Химено и М ац у и ,
п оражающих цилиндрические клетки эп и тели я , но не обра зующих
в них шаровидных телец, в отличие от фляшерийного вируса Я м а з
а к и FV. Штамм Фуруты резко различается по устойчивости к нему
пород шелкопряда: он не поражает китайскую 124 и Дайзо, но весьма
инфекционен д л я японской 124 и китайской 4. Серологически он о тл и чается
от вируса инфекционной фляшерии FV. В составе к оллекционных
штаммов С а к а ки , видимо, содержится вирус штамма Фуруты.
Штамм Химено S F V 2, в отличие от вируса инфекционной ф л я -
шерии FV, был назван малым вирусом фляшерии S FV . Установлено,
что последний, так же как FV , относится к вирусам, содержащим
Р Н К , поскольку поглощает урацил, меченый радиоактивным водородом.
Фурута (1977) сравнивал S FV с FV, особенно их инфекционность,
устойчивость к формальдегиду и повышенной температуре.
Породы тутового шелкопряда в разной степени восприимчивы к малому
вирусу фляшерии. Заразность самих гусениц, инфицированные одновременно
обоими вирусами, существенно зависит от титра р а зм н ож а в шегося
в них S FV (Фурута, Аидзава, 1973, 1974); когда гусениц породы
японская 124 зар аж али только FV, их инфекционное^ б л л а нлже,
чем при смешанном зараж ении и по мере увеличения в инокулюме
ти тр а SFV, <ЛД50 снизилась, тогда к ак с увеличением участия в смешанной
инфекции FV заметного влияния на смертность гусениц не
отмечалссь.
К формалину и позышенной температуре м ал ьп вирус фляшзрии
проявляе т устойчивость большую, чем вирус инфекционной фл яш зри и ;
это позволяет разделить эти вирусы в сл у ч аях смешанной инфекции,
если с помощью антисыворотки к S FV будет установлено его соучастие.
Тепловая обработка вируса при 6 5ЭС в течение 39 мин и н активирует
FV и не снижает активности SFV. Термотерапия при 37° С
ингибирует размножение SFV. Методом радиальной иммунодиффузии
в полиакриламидном геле установлено, что у гусениц при 2 7 °С со держание
антигена SFV в эпителии кишечника в течение каждого
возргста повышается и снижается во время линьки; если п х л е линьки
повысить температуру в помещении до 3 7 °С, то количество вирусного
антигена в течение наступившего возраста будет падать.
Штаммы Мацуи и Фуруты, обнаруженные в качестве участников
смешанных вирусных инфекций, такие, к ак штамм Химено, я в л яю т ся
малыми вирусами фляшерии S FV , с кубической симметрией строения
вирионов и наличием однонитчатои Р Н К . Они, т а к ж е к а к и ф л яш е р и й ный
вирус FV , наиболее близки к энтеровирусам, которые в х о д я т
в гр у п п у вирусов, объединенных под общим названием п и корн ави -
русов. Помимо вируса фляшерии, к ним относятся возбудители з а б о леваний
различных представителей членистоногих, от пчел до р а с ти тел
ьноядных клещей. Это мелкие вирусы (21—32 нм), со д ерж ащие
однонитчатую Р Н К , в отличие от д р у ги х вирусов с мелкими ви р и о нами
— парвовирусов (лат. p a rv u s — малый), у которых геном со стоит
из однонитчатой Д Н К .