3.3. Ядерный полиэдроз

Из истории изучения болезни. Вирус ядерного полиэдроза относится
к группе вирусов, содержащих ДНК, к роду Baculovirus, т. е,
палочковидные (лат. baculum — палка). Своеобразное кристаллографическое
наименование (полиэдры
— многогранники) эта группа
болезней получила по характерным
включениям, образующимся в
пораженных клетках в итоге формирования
нового поколения вирусов
(рис. 48). Способность образовывать
полиэдры присуща не
только этому вирусу; однако для
ядерного полиэдроза характерно
образование их именно в ядрах
клеток. Зтой болезнью поражаются
чаще всего насекомые из отряда
чешуекрылых; быть может, объясняется
это не только распространенностью
вируса, но и возможностью без особого труда обнаружить
полиэдры под микроскопом.
Типичным представителем вирусов ядерного полиэдроза является
возбудитель желтухи тутового шелкопряда — болезни, поражающей
главным образом личиночную и куколочную стадии насекомого и хорошо
известную шелководам. Одно из наиболее ранних и подробных
описаний желтухи шелковичных червей было дано французским ученым
П. Нистеном (1808) в обширном труде о болезнях насекомых. Желтуха
характеризуется заразительностью, широким распространением
на выкормках, большой вредоносностью, а ее возбудитель — стойкостью
к воздействию внешних факторов. Ряд нерешенных эпизоото-
логических проблем — условия передачи вируса следующему поколению,
распознавание и предупреждение латентной формы инфекции
и др.— продолжают представлять особый интерес вследствие большого
ущерба, наносимого этим заболеванием.
Поиски возбудителя желтухи шелковичных червей в прошлом
столетии совровождались возникновением разных гипотез, очень
далеких от его истинной природы. Судя по ранним литературным источникам,
полиэдроз насекомых не всегда удавалось отличить от других
заболеваний. В 1856 г. Е. Корналлиа и А. Маэстри независимо
друг от друга описали кристаллоподобные включения в клетках желтушных
шелковичных червей; они считали их признаком, но не причиной
болезни. Несколько позже причину возникновения болезни стали
приписывать бактериям, так как она очень часто сопровождалась
обильным размножением стрептокс-кков втеле насекомого. Н. М. Красильщик
(1896) приписал роль возбудителя желтухи бактерии, найденной
им в кишечнике и в общей полости тела больных гусениц,
и назвал ее Micrccoccus lardarius («личиночный микрококк»). Г. Болле
(1894) первоначально считал полиэдры кристаллами, как это установил
Версон, а затем подтвердил Ф. Габерландт (1871, 1872). Однако,
несмотря на то, что Р. Панебианко (1895) уточнил даже принадлежность
их к кристаллографической группе ромбододекаэдров, Болле
(1898) считал полиэдры ооцистой, спорулирующей стадчей некоего
паразитического протозоа, подобного кокцидиям. Он наблюдал, как

из полиэдра («ооцисты»), растворяющегося под действием кишечного
сока гусениц или раствора щелочи, выходит заключенная в нем зернистая
масса—«протоплазматическое содержимое, для которого полиэдр
служит оболочкой». Несмотря на несостоятельность ■ представления
о протозойном происхождении желтухи, описанная им картина выхода
из разрушенного полиэдра мелкозернистой массы соответствует
позднейшим наблюдениям относительно присутствия в них вирионов.
Таким образом, Болле оказался первым, кто рассматривал полиэдры
как этиологическое начало болезни.
Одним из первых, использовавших метод фильтрации тканевой
эмульсии желтушных гусениц, был С. Провацек (1907). Он установил,
что этот материал, пропущенный через несколько слоев фильтровальной
бумаги, после полного удаления таким способом полиэдров сохраняет
заразные свойства. Поэтому он смотрел на полиэдры как на реактивные
продукты пораженной клетки. Он применил технику фиксации
и окрашивания тканей больного насекомого, разработанную к тому
времени при изучении оспенной вакцины, эпителиомы птиц, а также
трахомы, в исследовании возбудителя которой он участвовал. Он
обнаружил в ядрах клеток и в гемоцитах желтушного шелковичного
червя мелкие, похожие на кокков тельца, окруженные капсулоподобным
веществом. Они напоминали возбудителей трахомы, которых он
отнес к протозоа и назвал хламидозоа. Возбудитель трахомы — «тельца
Провацека» в дальнейшем стали известны как Chlamydozoon trachomatis
ProwazeK (1907), затем — как риккетсии (1935) и, наконец,
в наше время — как вирус трахомы. В то время хламидозойная теория
происхождения желтухи имела своих последователей. Вольф (1910),
изучая полиэдроз сосновой пяденицы, подтвердил описание микроскопической
картины, данное Провацеком, и состоятельность его выводов;
он считал болезнь сосновой пяденицы хламидозоонозом и назвал
предполагаемого им возбудителя Chlamydozoa prowazeKi. Вольф
считал, что бактерии, в частности стрептококки — обычные спутники
заболевания, которые играют косвенную роль в патогенезе, ускоряя
его течение, а полиэдры являются продуктом реакции клетки.
В 1913 г. Провацек сообщил о результатах своих дальнейших
опытов фильтрации заразного материала, техника которой была
значительно усовершенствована. Приготовленная им из трупов желтушных
гусениц эмульсия пропускалась через свечи Беркефельда,
покрытые агаром. При таком методе гель-фильтрации фильтрат
не содержал ни полиэдров, ни бактерий, но зараженные этим фильтратом
гусеницы погибали от желтухи. В некоторых случаях личинки
могут заражаться материалом, свободным от полиэдров; этим он как
бы опровергал причастность полиэдров к этиологии, но и дальнейших
доказательств существования хламидозоа тоже не привел. В этих
опытах Провацек вплотную подошел к решению вопроса о вирусной
природе возбудителя желтухи, но признание этого положения с его стороны
не последовало.
Выяснение этиологической роли полиэдров продолжалось. Р. Глезер
(1918) пытался рассматривать их как носителей фильтрующегося
вируса. Аоки и Чигасаки (1921), проводившие опыты по иммунизации
шелковичных червей против желтухи, отметили, что полиэдры после
встряхивания в физиологическом солевом растворе и более чем десятикратного
центрифугирования оставались столь же заразными для
шелкопряда, как и не отмытые тельца. Высказывались предположения,
что заразное начало желтухи адсорбируется поверхностью полиэдров
и чрезвычайно прочно ими удерживается. Глезер с сотрудниками
(1934) не могли отделить полиэдры от инфекционного начала ни после
23-х последовательных промывок физиологическим раствором, ни
с помощью некоторых детергентов. У. Комарек и В. Брейндель (1924)
считали, что инфекция гнездится внутри этих телец и что сама поверхность
их в качестве оболочки заразного начала не инфекционна. Чтобы
освободить инфекционное начало, экспериментаторы старались по
возможности раздробить полиэдры, однако в те времена попытка
решить вопрос о пребывании вируса в полиэдре в значительной мере
нссила умозрительный характер. Только много позже благодаря сверхтонким
срезам и электронному микроскопу с увеличением в десятки
тысяч раз стали доступны наблюдению вирионы, погруженные в белковый
матрикс полиэдра.
А. Пайо (1924, 1926) находил, что кровь больного желтухой шелковичного
червя, освобожденная от клеточных элементов и полиэдров
центрифугированием и фильтрованием через тройной слой бумаги, все
еще заразна. Он установил, что желтуху можно вызвать, инокулируя
гемолимфой, взятой у гусениц через два дня после их заражения, т. е.
до появления полиэдров. Пайо считал, что болезнь вызывается ультра-
ми крсскопическим внутриклеточным паразитом, разрушающим ядра
некоторых клеток. Паразитов, по его мнению, он смог наблюдать
с помощью ультрамикроскопа1 сначала в цитоплазме, затем в ядрах
где они активно размножались, а впоследствии разрушали клетку
и переходили в гемолимфу. Паразиты были невидимы в световой микроскоп
при обычной системе освещения, но при ультрамикроскопирова-
нии они представлялись в виде мелких подвижных зерен диаметром
меньше 0,1 мкм. Эти зерна были видны только в свежих препаратах;
в крови здоровых гусениц он их не видел. Они задерживались фарфоровыми
фильтрами с мелкими порами, и фильтраты, полученные при
таких условиях, были незаразны. Пайо был уверен, что зерна должны
были иметь этиологическое значение, так как заразительность фильтрата
была связана с их присутствием. Эти мелкие частицы, встречающиеся
при полиэдерных болезнях чешуекрылых, он рассматривал как
особую группу вирусов и назвал их бореллинами по имени Борелля,
профессора Пастеровского института в Париже.
Представление о том, что желтуха вызывается ультрамикроскопи-
ческими паразитами, похожими на кокков, близких риккетсиям и названных
в одном случае — хламидозоа, в другом — бореллинами, не
получило всеобщего признания. С наступлением в вирусологии фазы
1 Ультрамикроскоп впервые сконструирован в 1902 г.; благодаря сильному
боковому освещению частицы, не видимые в оптический микроскоп (меньше 0,15 мкм),
взвешенные в жидкости, рассеивают свет и светятся на черном фоне. С изобретением
электронного микроскопа область использования ультрамикроскопов значительно
сч-знлась.
электронномикроскопических исследований оно стало достоянием
истории.
Ранние вирусологические исследования в начале XX в. не могли
пройти бесследно д л я тех, кто стремился выяснить этиологию ж е л т у х и .
Мысль о вирусной природе болезни появилась в специальной л и тер а ту
р е еще в начале второго деся тилетия . Одними из первых, высказавших
это предположение, были Хаяши и Сако (1913). Этого мнения
придерживались Глезер (1915), А кква (1918), Комарек и Брей н д ел ь
(1924). Упоминание о вирусе в качестве возбудителя ж ел ту хи постепенно
приближалось к истинному пониманию природы этого патогена
(Сузуки, 1929; Китажима, 1932; Исимори, 1934; Пайо, 1936, 1939;
Ле ть е, 1939). Первые электронномикроскопические и с с л ед о в ан и я
вируса ядерного полиэдроза, выполненные Г. Б ергольдом (1947),
не оставили места д л я дальнейшего разноречивого описания возб уди тел
я этой болезни.
Обзор основных н а п р а в л е н и й в истории выяснения этиологии ж е л тухи
был бы не полным, если не упомянуть теорию спонтанного возникновения
ж ел ту хи , к оторая противопоставлялась представлению
о паразитарном ее происхождении. Успех в области эк сп ер им ен т ал ь ного
воспроизведения злокачественных опухолей, возникновение
которых приписывалось деятельности особых вирусов, и сведения о т а к
называемых канцерогенных (вызывающих рак ) веществах побудили
исследователей ж ел ту хи создать подобные ж е гипотезы. Сасаки (1910)
утв ерждал, что ж е л ту х а может быть вызвана разными причинами:
впрыскиванием в общую полость гусениц бактериальных продуктов ,
формалина, камфоры, или дачей им какого-нибудь др у го го корма,
кроме листьев шелковицы. Ук азан и е на то, что кормление гусениц
маклюрой, скорцонерой и одуванчиком п ровоцируе т возникновение
желтухи, можно было встретить у некоторых отечественных авторов
(Дитрихе, 1925 и др .). Италь ян ски е исследователи (Венерозо, 1934)
отмечали, что таким ж е провокационным действием обл ада ет фтористый
водород. Поданным С узуки , этим же действием обладает физиологический
рас твор поваренной соли при в п ры с к и в ан и и его в общую
полость гусеницы. А кква (1918— 1935) склонен был сочетать у л ь тр а -
вирусную и провокационную гипотезы возникновения спонтанной
жел ту хи . В 1928 г. он высказал предположение, что возбудителем
желтухи явл я е тс я болезнетворное начало, образующееся в организме
в результате ф ун кц и он ал ьн о го расстройства неустановленного х а р а к тера.
Появлению ф ункционал ьного расстройства способствуют внешние
причины, в частности н и зк ая температура и высокая влажность
во время выкормки. Возникшее вследствие этого болезнетворное начало
способно проходить через мелкопористые фильтры (свечи Берке-
фельда), не т е р я я инфекционности. Возникнув и вызвав заболев ание ,
оно способно н ак ап ли в ать ся в пораженном организме; заболевшие
клетки принимают, по его мнению, непосредственное участие в «авто-
калитическом» воспроизводстве «ультравируса» ж е л ту х и . Гипотеза
спонт анного происхождения вируса не по л ь зо в ал а сь широкой популярностью,
т а к к ак она слишком явно п редполагала возможность
возникновения одной формы жизни (вируса) из другой (насекомого),
природа которой ничего общего с ней не имела. Между тем от э ти х
надуманных гипотез не т а к уж д а л ек о было до представления о существовании
латентного вируса и роли внешних факторов в е го ак ти в и зации
(пробуждени I).
Вирионы вируса ядерного полиэдроза и их морфогенез. З р елы е
единичные особи в и р у с а— вирионы находятся внутри полиэдра.
Чтобы извлечь их, белковый матрикс полиэдра растворяют одним из
р азр аб о тан ны х д л я этого способов. Вирионы можно т а кж е увидеть
на ультратонких срезах через полиэдры под электронным микроскопом.
BiipnoH состоит из белкового ф у тл я р а — капсида, по к ры то го тонкой
мембраной. Внутри капсида находится двойная полинуклеотидная
нить дезоксирибонуклеионовой кислоты (Д Н К ). Предполагают, что
эта весьма дли н н ая спираль вирусов, содержащих Д Н К , состоит из
более коротких нитей, связанных между собой оксиаминокислотами.
Б л а г о д а р я этим аминокислотным эфирным с в я зям обеспечивается необходимая
гибкость гигантской молекулы Д Н К при у к ладк е ее в ф у тл яр
капсида. Это умозрительное предположение п одтверж да ет ся тем, что
в препаратах Д Н К после их тщательной очистки от белка всегда обнар
уж и в а е тся небольшое количество аминокислот, которые, по всей видимости,
стр у к ту р н о св я заны с полинуклеотидной нитью Д Н К . В палочковидном
вирионе вируса ж ел ту хи длиной около 300 нм нить Д Н К
сложена в форме укороченного ж гу т а . В модели, которую предложили
Н. Г. Шведчикова, Б . П. Уланов и Л . М. Тарасевич (1969), после
ск р у ч и в ан и я кольцевидной (циклической) нити Д Н К образовавшийся
ж гу т скл адывается пополам и, в свою очередь, ск р у чи в ае тся вторично,
чередуя при этом направление ск ручивания. В итоге нить ви р у с а, содержащего
Д Н К , гр ан у л е з а о к азы в ае тся свернутой в последовательные
суперспирали первого, второго, тре ть его и т. д. поряд ка . Этот
ж г у т сос тавл яет сердцевину вириона (нуклеоид).
Наблюдения с помощью светового микроскопа з а цитопатическими
изменениями в пораженных вирусом к летках пытались наладить многие
исследователи. Клеточные ядра тканей здорового шелковичного
ч ервя содержат зернышки и глыбки хроматина; по Пайо, в к ле тк ах
жирового тела они особенно велики и их всегда более де ся тка . Первый
при зн ак пораж ения клетки вирусом — сли ян и е хроматиновых зерен
в кр уп ны е, интенсивно красящ и еся глыбки. Внутри осветленных пространств,
возникших после агре гации ядерного хроматина, на препар
а т ах , окрашенных по Гимзе, обнаружив аются мелкие розовые включ
ения, л ежащие поодиночке или небольшими группами. При внимательном
исследовании ничем не обработанных нативных препаратов
гемоцитов в тождественных у ч а стках ядра обн ар уж и в али сь оживл
енно пляшущие частицы с большой вибрационной амплитудой. З а тем
остатки хроматиновой массы в ядрах больных клеток постепенно
исчезают и в светлых зо н ах , где наблюдались на окрашенных препар
а т ах мелкие розовые включения, возникают полиэдры (рис. 49).
Вначале к р а я их еще сл або окрашиваются красками , контуры многогр
ан н и к а хорошо видны, но вскоре они совершенно перестают окрашив
а ть ся и начинают сильнее преломлять свет. Ядра клеток, в которых
появились полиэдры, наб ухаю т до размеров, зн ачи тел ьн о превы
шающих диаметр нормального ядра: в
ядре ничего не остается, кроме сл едов
хроматина и его оболочки с з а ключенными
в ней полиэдрами; иногда
хроматиновая масса сохраняе тся
до разрушения ядра, но чаще исчезает
до наступления этого момента.
Появление в л аб о р ато ри ях ви р у сологов
электронного микроскопа
позволило проследить за морфогенезом
вируса ядерного полиэдроза на
протяжении всех его этапов — с момента
возникновения вирионов и До
заключения их в полиэдры. Вирионы
возникают в т а к называемой виро-
плазме (участок вирогенной стромы —
к арк ас кариоплазмы из ф и б р и л л яр ного
белка), различимой под электронным
микроскопом в виде электронно-
плотных участков яд р а . Виро-
генная строма занимает незначительное
место в клеточном ядре; в ней
беспорядочно расположены обра зую щиеся
вирионы. По мере формирования вирионов сетевиднсе строение
стромы становится более четким, потом она начинает истощаться
и постепенно исчезает. В стороне от вирионов п оявляется двойная
мембрана, обладающая сродством с их поверхностной структурой; о т дельные
вирионы или пучки их прикрепляются к ней и о к р уж аю т ся
ею в виде сплошной оболочки.
На др у гом участке ядра начинает формироваться матрикс полиэдров;
он тоже обладает сродством с мембраной, окружающей вирионы.
В белок матрикса погружаются одетые в оболочку вирионы. З а к лю чи
т ел ьн ая стадия репродукции вируса ядерного полиэдроза за в ерш а е
т с я формированием зрелы х вирионов, помещенных внутрь полиэдров.
З ап о лн и в ядро, полиэдры разрывают его оболочку, к л е тк а перестает
существовать, и мириады полиэдерных телец вместе со всем ее
содержимым оказываются в гемолимфе.
С. М. Гершензон полагает, что во всех сл у ч а я х , к огд а в ядрах
клеток имеются полиэдры одинакового размера, они возникли в итоге
одного р епродукционного ц и к л а . Е сли ж е встречаются полиэдры
разн ого размера, то это р езу л ь та т д вух различных ц и к ло в р а зм н ож е ния
вируса. С момента за р аж ен и я клеток и д о заключ ения большинства
вирионов в полиэдры проходит около дв у х суток.
Х арактеристика полиэдров. Разм еры полиэдров 3—5 мкм в поперечнике,
хотя встречаются более мелкие — 0,5 и крупные эк з ем п л я р
ы — до 15 мкм. Согласно С. М. Гершензону, по форме полиэдры
принадлежат к одному из 32 возможных видов кристаллографической
симметрии — к гексатетраэдрической, относящейся к высшей категории
системы кристал лов , к кубической сингонии. Из возможных
семи форм э ти х к ри с тал л о в среди полиэдров
обн ар уж ен о пя ть . К аж д а я форма приурочена
к определенным видам бабочек: т е т р а эдры
—у вируса монашенки и д р ., гексаэдры—
у пчелиной моли и д р ., тетрагональные три -
тетраэдры — у д уб ового шелкопряда, т е тр а гексаэдр
— у непарного шелкопряда, ромбический
додекаэдр — у тутового шел копряда
(рис. 50). Полиэдры ядерного полиэдроза
шелковичных червей представляют собой дв енадцатигранник,
у которого к аж д а я плоскость
— ромб. Появлени е у насекомого полиэдров
несвойственной им формы о б ъ я сн я е т ся
мутацией вируса.
Гершензон (I960) наблюдал у тутового ш ел к оп ряда мутанта с т е т раэдрическими
полиэдрами, свойственными ви р у су монашенки или
совки, а К- Аидзава (1958) — мутанта с гексаэдрическими п о ли эдр ам и ,
свойственными ви р у с у пчелиной моли. И звл ек а я т аки е полиэдры
микроманипулятором и з а р аж а я ими гусениц шелкопряда, Гершен-
зону удалось получить мутантные штаммы, стойко воспроизводящие
в пассажах способность к формированию полиэдров не типичных д л я
зараженного ими вида насекомого. Изменение формы полиэдров не
вызвано условиями их образования при зараж ен и и вирусом не свойственных
ему видов насекомых, а обусловлено мутацией вируса, приводящей
к изменению структурных особенностей его вещества. При смешанной
инфекции в ядре одной и той ж е клетки, т. е. при одних и тех же
условиях кристаллизации, встречались вместе обычные и мутантные
формы полиэдров. Поэтому, по мнению Гершензона, форма их м ож е т
с л уж и т ь надежным диагностическим признаком д л я определения видовой
принадлежности вируса ядерного полиэдроза . Если насекомое з а ражено
чужеродным д л я него вирусом, у заболевшей особи, независимо
от вида зар аж аем о го насекомого, о бр а зую тс я полиэдры, форма
которых присуща именно этому вирусу. По другим данным, форма
полиэдра к онтролируется генами не ви р у с а, а насекомого (Аидзава
, 1962).
Полиэдры сил ьно преломляют свет, но без двойного преломления
в поляриметре. При тщательном исследовании видно, что у полиэдров
периферия светлее и с менее плотной, чем в центре, консистенцией.
От надавливания иглой микроманипулятора они трескаются и р а с падаются
на мелкие кусочки неправильной формы; при этом освобождается
множество мелких зерен, содержавшихся внутри полиэдра.
Д в и г а я покровное стекло н ативного п р еп а р а т а , можно поворачивать
полиэдры и рассматривать их форму со всех сторон; изредка встречаются
полиэдры, испещренные трещинами. Полиэдры т яж ел е е воды,
поэтому водная взвесь их сравнительно быстро о тстаивается; цен три ф
у ги р у я эм у ль си р о в ан ны е в водной среде тк ан и больных гусен и ц ,
можно за короткий отр е зо к времени собрать любое количество полиэдров.
Р я д последовательных повторных промываний и ц ентрифугирований
удал яю т обломки клеток, жировые к ап л и , други е посторонние

сопутствующие компоненты и получают полиэдры в довольно чистом
состоянии.
Полиэдры не расстворяются в холодной и горячей воде, в с е р о у гл е роде,
спирте, эфире, ацетоне и д р у ги х органических р а с тв о р и т ел ях ,
но растворяются в подогретых концентрированных растворах кислот
и в разведенных растворах щелочей (Бергольд, 1947). Растворяются
они т а кж е в солянокислом пепсине и в натуральном желудочном соке.
Растворив полиэдры в слабой щелочи и удалив щелочь диализом,
можно получить три фракции преципитатов с сернокислой магнезией
и хлористым натрием. В отличие от многочисленных жировых шариков
в поле зрен и я микроскопа полиэдры не чернеют от осмиевой кислоты,
не окрашиваются Суданом, т. е. не содержат ж и ра .П оли эдры дают все
цветные реакции на белок и потому хорошо окрашиваются пикриновой
кислотой; на таком препарате, особенно с дополнительной фонирующей
окраской, отчетливо видна форма многогранника. Эта о к р аска р ек о мендуется
при наличии в поле зрения телец, похожих на полиэдры.
Полиэдры не окрашиваются обычными микробиологическими и гистологическими
красками — кислыми и основными — или о к р аш и в а ются
очень слабо по периферии, к он тури руя их и о к р аш и в а я фон
вокруг многогранников. Хорсшэ выраженную о к раску такими к р а си телями
можно получить только после протравливания полиэдров
кислотами или щелочами и при значительной длительности дей стви я
красителей. Препараты, обработанные натронной щелочью, содой или
слабым раствором соляной кислоты и промытые водой, хорошо ок раш и ваются
аэур-зози н ом по Романовскому—Гимзе. Можно т а кж е окрасить
подкисленные и подогретые препараты полиэдров триацидом Эрли ха.
Д л я более четкой окраски углов и граней полиэдров при к ри стал ло графическом
исследовании Гершензон обрабатывал их 6%-ной карболовой
кислотой с последующей окраской карболфуксином.
По данным Б ергол ьд а (1968), белок полиэдров харак тери зуе тс я
следующими показателями: константа седиментации S23 12,85; диффузия
D , 10 —7 см2 с е к - 1 — 3,12; молекул ярная масса 378 ООО; изоэлектри-
ческая точка при pH 5 ,3—5,6. Этот белок содержит 17 аминокислот,
преобладают аспара гинов ая кислота, аргинин, лейцин, серин и гл и церин.
Серологич еская вариабельность этих белков недостаточно и зу чена;
р еакци я двойной диффузии в а гар е пок азала , что белок, помимо
групповых антигенов, общих д л я различных полиэдров, содержит
т а кж е специфические, присущие полиэдрам каждого из вирусов.
Белки гемолимфы и полиэдров у одного и того ж е насекомого серологически
не идентичны.
Белковые субъединицы в полиэдрах расположены в виде п рави л ь ной
кристаллической решетки. По мнению Р. Фауста и Ю. Адамса
(1966), с тр у к ту рны е особенности и механические свойства полиэдров
различного происхождения, к ак ядерного, т а к и ц и топлазматического,
обусловлены найденным в них кремнием. Начало распада белкового
матрикса при слабощелочном воздействии кишечного сока гусениц
вызвано растворением кремния и, вследствие этого, исчезновением
связи между отдельными субъединицами белка в кристаллической
решетке полиэдра. Кремний участвует в построении к ри стал лов биогенного
происхождения не то л ько в полиэдрах, но и в параспоральных
к ри сталлах бактерии тюрингиензис и в кристаллических вк лючен и ях
белковой природы у растений, пораженных некоторыми вирусами.
Б ел ок полиэдров устойчив к протеолитическим ферментам и не
подвержен гниению, что обусловливает длительную сохраняемость
вируса желтухи в почве. Д л я его переваривания протеолитическими
ферментами животного и растительного происхождения необходима
пред вари тельн ая ден ату р ац и я бел ка полиэдра в кислой или щелочной
среде. Щелочная реакция кишечного сока, ден атури руя белок в периферическом
слое полиэдра, создает возможность дл я гидролитической
деятельности пищеварительных ферментов гусеницы. Р . Фауст и
Ю. Адамс показали, что прогревание кишечного сока при 1 0 0 °С в т е чение
получаса или извлечение пищеварительных ферментов путем
ди али за сока лишает его способности растворять полиэдры и освобождать
заключенные в них вирионы. Недиализированный, но прогретый
кишечный сок гусениц тутового шелкопряда сохраняе т способность
растворя ть 1/3 белка полиэдра, тогда к ак интактный (недиализированный
и непрогретый) кишечный сок с pH 8,6 растворял 3/4 белка в полиэдрах.
Отношение полиэдров к растворителям, красителям, устойчивость
к действию протеолитических ферментов и отчасти их механические
особенности св язаны с наличием серосодержащих аминокислот, сб ли жающих
белок полиэдров с каротинами и каротиноидами животного
происхождения и обусловливающих проявление этих свойств. По
данным Л . М. Тарасевич (1975), при Длительном хранении полиэдров
свободные сульфгидрильные группы окисляются до дисульфидных,
цистеин переходит в цистин — соединение с более прочными связями;
вследствие этого длительно хранившиеся полиэдры обладают всеми
этими свойствами в большей степени, чем недавно образованные в т к а нях
больного насекомого.
Процесс заражения шелковичных червей желтухой. Основными
естественными воротами д л я за р аж ен и я тутового шелкопряда вирусом
желтухи является пищеварительный тракт . Считается т а кж е , что ви рус
может инфицировать через р ан ки на коже и д аж е через ды х а л ь ц а .
Однако наиболее уязвим средний отдел кишечника. Под воздействием
кишечного сока полиэдры в средней кишке разруш аю тся и н ах о д я щиеся
в них вприоны освобождаются. Процесс этот осуществляется
за сравнительно короткий промежуток времени, в течение которого
полиэдры находятся в средней кишке, куда они попадают вместе с пищей;
через 50 мин после поглощения гусеницей корма его неассимили-
рованная до л я вместе с частью полиэдров начинает э в а к у и р о в а т ь с я
из кишечника в виде экскрементов. Известно, что полиэдры очень стойки
к разрушительному действию пищеварительной протеазы и кишечного
сока с pH близким к нейтральному. Кишечный сок с pH выше
9—9,5 растворя ет их и освобождает находящиеся в них вирионы,
которые тож е могут быть повреждены в разной степени щелочной средой.
Однако это происходит не всегда, поэтому интересно решить, с чем
св язан о сохранение в этих условиях и н ^ к ц и о н н о й способности вируса
— с видовыми особенностями поражаемого насекомого или же

с его возрастным состоянием. В. Стильз и Я- Д . П а с ч к е (1980) исследовали
pH в средней кишке в различном возра ст е личинок т р е х видов
комаров из рода аэдес, стремясь обнаружить св я зь между р е а к ц и ей
кишечного сок а и восприимчивостью личинок к в и р у с у яд ер н о го
полиэдроза. Они не обнаружили значительной разницы pH у л и чи н о к
разны х видов одного возра ст а. Однако концентрация водородных ионов
на всем протяжении средней кишки изменялась от зн ачи тел ьн о боль шей
величины в передней его части к низкой — в задней. Графически
топография этого градиента имела вид к лина, ш и р о кая ч а с т ь к о то р о го
расположена у границы с грудным отделом. С возрастом к иш е ч н и к
удлиняется, протяженность зоны с высоким pH увеличивается и о п а с ность
повреждения вирионов возрастает в св я зи с их более д л и т е л ьны м
прохождением зоны с высокой щелочностью. Т ак, у всех т р е х ви д ов
в третьем возрасте протяженность участка средней кишки с высоким
pH (9—10) стала гораздо значительнее и заметно снизила сь восприимчивость
к вирусу: у личинок в возрасте 12 ч она вы р аж а л а с ь в гибели
56% особей, а в возрасте 74 ч — то л ько 8% . У молодых л и чи н о к щ е лочность
кишечного сока на всем протяжении кишечника была дос т аточной
д л я растворения полиэдров и освобождения вирионов и тем
самым д л я за р аж ен и я . По мере роста за д н я я треть средней киш ки ,
в которой могли бы выжить вирионы, начиная с тре ть его в о зр а ст а о т д
ал я л а с ь на малодоступную д л я них дистанцию. К сож ал ению, а н а л о гичные
исследования применительно к гусеницам ту то во го ш ел к о пряда
ждут еще своих исполнителей.
Проникновению вируса в клетки за р аж а ем о го насекомого предшествует
освобождение вириона от оболочек. Протеиновый ф у т л я р —
капсид, внутри которого расположен носитель генетического к о да —
Д Н К вируса, окружен тонкой оболочкой — мембраной р а з в и ти я и з а ключен
в полиэдр (рис. 51). Сначала белковый матрикс п о ли эдр а гидр
о ли зу ет ся в средней кишке гусеницы, при участии протеолитиче-
ских ферментов кишечного сока в условиях повышенной щелочности,
а освободившиеся от него вирионы проникают в гемолимфу по меж-

клеточникам эпителия кишечника.
Способ перемещения вирионов к основной
зоне их воспроизводства —
к тк ан ям общей полости — не совсем
ясен; некоторую роль в этом
играе т механический перенос вирионов
вместе с продуктами пищеварения, всасываемыми эп и т е лием
кишечника. Методом радиоавтографии установлено, что после
ск армли ван и я гусеницам шелкопряда полиэдров, меченых р ад и о а к тивным
фосфором, метка обнаруживалась через двое суток в м еж к л е точном
пространстве средней кишки (Гладышева, Мамедниязова,
1968). Имеются т а кж е электронные фотографии, свидетельствующие,
что вирионы палочковидных вирусов проникают сквозь р яды раб-
дориума эпителия и даж е внедряются в к ан а л этих плазматических
образований, сходных с ресничками и ограждающих фронт вс асывающих
и секретирующих клеток (рис. 5 2—54). Р ан е е были обнаружены
хроматографические различия между свободными вирионами из
гемолимфы и ви рионами из полиэдров (В аан , 1965). Затем мгтодом
микрофильтрации вируса ядерного полиэдроза большой пчелиной
моли удалось установить, что свободные вирионы, не заключенные
в полиэдры, не имеют мембраны развития (Стэрс и Эллис, 1971). Т. Ка-
варабата (1974) с помощью центрифугирования в градиенте плотности
и изучения под электронным микроскопом свободных вирионов из
гемолимфы зар аж ен ны х гусениц тутового шелкопряда отметил, что
эти вирионы лишены оболочки. Каварабата и Арат аке (1978) установили,
что инфекционность оголенных и неоголенных вирионов при
пероральном и интрацеломальном за р аж ен и и неравнозначна. Хотя
вирионы без оболочки встречались т а кж е в щелочном кишечном соке
среди освободившихся от матриц полиэдров (Б е р го л ь д , 1958), они в

этих условиях редко теряю т мембрану р азви ти я , т а к к а к оголение
нуклеокапсида приводит к агглютинации (слипанию) вирионов и полной
инактивации вируса. Где именно вирион освобождается от оболочки
— на пути в общую полость или в ней самой, остается не выясненным.
Т. К а в ар аб а т а с соавторами (1980) испытывали методы очистки
и изучали свойства вируса ядерного полиэдроза тутового ш ел копряд
а , освобожденного из полиэдров, растворенных в кишечном соке гусениц.
Д л я растворения полиэдров вне организма гусениц последних
в пятом возра ст е за с т а в л ял и голодать некоторое время, затем подвергали
воздействию электрического шока, чтобы рвотой вызвать выделение
кишечного сока . Количество выделенного сок а колебалссь
от 0,04 мл у гусениц, голодавших 6 ч, до 0,5 мл — у голодавших
36 ч. Сок профильтровывали через многослойный бумажный фильтр
и центрифугировали 20 мин при 10 000 G и 4 ° С. Полиэдры суспензировали
в этом соке и инкубировали при 2 7 °С 30 мин. Суспензию
в соке с растворенными полиэдрами центрифугировали при 2 000 G
10 мин д л я освобождения вирионов от примесей; очищали вирионов
из супернатанта в градиенте плотности сахарозы. Полученный препарат
содержал покрытые оболочкой вирионы, оголенных ж е вирионов
(нуклеокапсид) среди них не было. Этим вирусом за р аж ал и к уколок
инъекцией в гемоцель, а гусениц слинявших на третий в о зр а с т— спаиванием
суспензии с вирионами. Существенной разн и цы в резуль татах
з а р аж ен и я , зависящей от его способа, авторы не обнаружили.
Б ер д (1959) наблюдал присутствие множества вирионов без оболочки,
прикрепленных к ядерной мембране инфицированных клеток.
По-видимому, проникновению вируса, содержащего Д Н К , в ядро
предшествует депротеинизация вирионов или ж е оно сопровождается
этим актом. Когда пораженные вирусом клетки погибают и р азр уш аются,
размножившийся в них вирус, включая свободные вирионы,
и полиэдры, поступает в гемолимфу. К авараб ата установил, что в течение
всего периода размножения вируса из тканей гемоцеля в гемолимфу
поступает множество вирионов, в том числе без оболочки р а з вития.
Экспериментаторы обычно используют в качестве инокулюма
отмытые полиэдры или гемолимфу жел тушных гусениц. Сравнительная
эффективность применения тех и дру ги х зависит от выбора ворот инфекции.
В гемолимфе нет тех условий, которые в средней кишке гусеницы
приводят к растворению полиэдров и выходу из них вирионов.
Поэтому при и н о к у л яц и и гусениц через рот вирионы с оболочкой развития
из полиэдров оказываются более инфекционными, чем введенные
в кишечник вирионы из гемолимфы желтушной гусеницы, лишенные
оболочки. В гемолимфу вместе с полиэдрами из разрушенных клеток
попадает какое-то количество свободных вирионов без оболочки. Введенные
непосредственно в общую полость, они оказываются в тысячу
раз инфекционнее, чем вирионы с оболочкой из полиэдров: Л Д 60 при
количественном учете инфекционного начала в единицах оптической
плотности д л я фракции свободных вирионов без оболочки составляет
Ю1 °, а дл я фракции вирионов с оболочкой развития, освобожденных из
полиэдров,— 107. Высокоинфекционные фракции гемолимфы з а р а женного
насекомого, по свидетельству Каварабаты, всегда содержат
нуклеокапсиды (вирионы без мембраны развития). Установлено, что
более 80% инфекционности гемолимфы желтушного насекомого определяется
присутствием вируса именно в этой форме. Высокую инфек-
ционность гемолимфы желтушных гусениц, в которой еще отсутствовали
полиэдры, наблюдал Аидзава (1967) при впрыскивании се в общую
полость насекомого, но он пояснил это обстоятельство менее убедительно,
чем Каварабата.
Трансовариальная инфекция вируса. Установлено, что энтомо-
патогенные вирусы могут о ст ав а ть ся в организме насекомого на протяж
ен и и всего онтогенеза, преодолевая при этом метаморфоз и переда
в а я сь трансфазно — от личиночной до имагинальной стадии. Энтомологи
отмечали, что у свободноживущих насекомых в естественных
усл ови ях заболеваемость полиэдерной болезнью в первый год своего
возникновения обычно не принимает эпизоотического х ар а к т ер а ;
массовая гибель наблюдается т о л ь к о после второго или третьего года
появления больных гусениц. Одно из приемлемых объяснений сводится
к тому, что зар аж ен н ая бабочка способна передавать инфекцию части
своего потомства и это приводит к накоплению вируса в популяции
(Глезер).
Ж е л ту х а тутового шел копряда не исключение в этом отношении:
известны многочисленные данные относительно о б н а р уж ен и я полиэдров
в теле бабочек и в отложенных ими яйцах. Еще Б о л л е находил
полиэдры у бабочек тутового шелкопряда. Много позже Ребуйон
и Пайо обнаружили признаки присутствия вируса желтухи у бабочек,
а Пайо — присутствие вируса внутри яйца. По данным J1. М. Тарасе-
вич (1953), зар аж ен и е вирусом поверхности грены — основной источник
возникновения желтухи на выкормке; дезинфекция грены значител
ьн о сокращает заболеваемость гусениц. Э. А. Штейнхауз у к азал на
существование д вух способов передачи зараженной самкой вирусной
инфекции следующему поколению. Во-первых, с помощью контаминации,
т. е. за гр я зн ен и я вирусом поверхности яйца (лат. co n tam in o —
пачкаю). В ы л у п л я я с ь , гусеницы прогрызают скорлупу и заглатывают
находящиеся на ней полиэдры. Во-вторых, когда вирус оказывается
внутри яйца, то возможны два пути за р аж ен и я зародыша: непосредственное
зар аж ен и е зар о дыш ево го ди ск а или клеток питательного
ж ел тк а ; последние заглатываются на поздних стадиях эмбриогенеза
вместе с вирусом, и гусеницы оказываются заражены перед их вы л уп .
лением через кишечник.
Т ак как вирус проникает в грену на начальных с т ади ях овогенез
а — до образования хориона (скорлупки), не исключена возможность
более раннего за р аж ен и я ооцита с последующим вовлечением вируса
в клетки зародышевого диска, т . е. герминативным путем. Г. И. Ермакова
и Л . М. Тарасевич (1968) провели исследование с помощью иммунофлюоресцирующих
антител (сывороток) по методу Уоллера и Кунса
д л я вы я вл ен и я вирусного ан ти ген а в грене тутового ш ел к оп р яда ,
зар аж ен н о го желтухой на стадии гусеницы. Присутствие вирусного

антигена определ яли у извлеченных из грены зародышей и в околоплодной
жидкости яйца. Флюоресцирующая серологическая метка
обн аружи ла наличие подавляющей части вируса в виде полиэдров и дисперсного
вирусного антигена в околоплодной жидкости, а не в з а родыше.
Возможно, что в передаче вируса ядерного полиэдроза следующ
ем у поколению участвуют самцы. С. Н. Алимухамедов (1959) сфотографиров
ал полиэдры в сперматофоре и в копулятивной сумке самки
среди выходящих из сперматофора сперматозоидов (рис. 55). Их проникновение
удалось проследить до сперматеки (семяприемника). Можно
п редположить , что, хо тя поступательное движение сперматозоидов
по направлению к микропиле по спиральному кан ал у сперматеки в состоянии
увлечь за собой отдельные полиэдры, последние из-за своих
размеров не могут пройти по к анал ам микропилярных трубок внутрь
оплодотворяемого яйца. Однако, поскольку стало известно, что вместе
с полиэдрами могут о к а за т ь с я свободные вирионы и д аж е нуклео-
к апсиды, не исключена возможность , что этот либерализованный
(освобожденный от белковой оболочки) вирус из разрушенных клеток
в состоянии попасть в извергаемую в половые пути самки сперму ж е л тушного
самца.
Гусеницы, вылупившиеся из грены, среди которой выборочным
микроскопированием установлен высокий процент зараж енных яиц,
частично погибают от ж ел ту хи в первые дни после вылупления (Дика-
со в а , 1948; Ганиева, 1949). При слабом зараж ен и и и небольшом проценте
инфицированных особей можно не заметить появления ж е л туш ных
гусениц в младших во зр а ст ах ; т а к а я вык орм ка — скрытый очаг
вирусной инфекции, способный проявить себя в форме эпизоотии
с наступлением старших возрастов.
Латентный вирус ядерного полиэдроза. Внезапное возникновение
эпизоотии ж ел тухи среди совершенно благополучной выкормки, в усл
о ви ях , исключающих возможность заноса вируса извне, длительное
вр ем я п р и вл ек ало к с ебе внимание исследователей. Стремление предотвратить
прижизненное зар аж ен и е побудило их поставить опыты
с воспитанием гусениц из дезинфицированных с поверхности яиц
поодиночке в ст ери льных сосудах, на стерильном корме. Еще более
надежными к азали с ь эксперименты с ку ль ту р ой к л е то к от внешне
здоровых гу с ен и ц в усл о ви ях , полностью исключавших экзогенное
зараж ен и е; и при всем том в этой куль туре к ле то к спустя 10 дней р а з ви
л ся спонтанный полиэдроз. Понадобилось время и значительные
усилия экспериментаторов, чтобы до к а зать несостоятельность представл
ен и й о возникновении в этих сл у ч а я х ви рус а «из ничего» —
спонтанным самозарождением и найти более преемлемое решение.
С. М. Гершензон р азли ч ал у тутового ш ел копряда две категории
бессимптомного, инаппаратного (не проявляющего себя) носительства
вируса ж е л т у х и ; во-первых, это может быть состояние инфекции при
зар аж ен и и малыми дозами немногих клеток тканей и затянувшегося по
этой причине инкубационного периода болезни; в том ж е направлении
м ож ет действовать комплекс внешних условий, неб л агоп ри ятны х д л я
обеспечения обычного темпа развития забо л ев ан и я . Во-вторых, су ществует
д р у г а я к ате гория бессимптомного носительства вируса —
л а т ен тн а я (скрытая) инфекция; она проявляе тся в том, что вирус, вместо
ак ти вн ого р азмнож ения в к л е тк ах и р а зр уш ен и я и х, переходит в особое
неболезнетворное состояние, включается в ядерный ап п ар а т к л е т ки
и вместе с этим аппаратом при делении клеток передается следующему
поколению. Гершензон (1956— 1958) сравнил латентное вирусо-
н о ситель ство у насекомых с лизогенией бактерий — стабильной ассоциацией
бактериофага с клеткой. Это полезное сравнение помогает л у ч ше
понять латентное вирусоносительство, т а к к ак сущность взаимоотношения
геномов клетки бактерий и фага изучена гораздо полнее,
чем аналогичные отношения при латентной инфекции. Фаг находится
внутри бактерии в форме профага; Д Н К его и бактерии ассоциируют
др у г с другом, а при размножении бактерий эта система передается
потомству вместе с потенциальной способностью ее к лизису и к продуцированию
нового поколения фагов. Фаги из лизогенных куль тур,
способные вызывать лизогению, называются умеренными: при за р аж е нии
ими чувствительных (восприимчивых) куль тур бактерий часть
к л е то к л и зи р у е т с я , к а к при поражении их вирулентным фагом, но
какое-то количество кле ток выживает и д а е т начало лизогенной к у л ь туре.
Иначе говоря, в зараженной бактериофагом бактериальной клетке
происходит одна из д в у х реакций: лизис или лизогениэация . В первом
случ ае умеренный бактериофаг, подобно вирулентному фагу,
растворя ет к л е тк у , освобождая образовавшееся в ней новое поколение
фагов. Во втором — геном фага интегрирует с геномом бактерии
и п ревращается в профага, со х р ан я я при этом фаговую Д Н К . Мирное
равновесие ассоциации профаг-клетка обеспечивается синтезом специального
фактора иммунитета — репрессора, подавляющего способность
фагового генома начать литическую реакцию. Нарушение этого
р а в н о в е си я называется индукцией; индуцирующими факторами могут
бы т ь ионизирующее облучение, ультрафиолетовые лучи, органические
перекиси, некоторые антибиотики и т . д . Часто появление в кле тке
профага сопровождается наследуемыми изменениями каких-либо
свойств бактерии. Отличие латентного вируса (провируса) от профага,
по заключению Гершензона, состояло в том, что провирус не п р ед о х р а няет
насекомое от за р аж ен и я его активным вирусом этого ж е происхождения,
тогда к ак присутствие профага и зб а в л я е т бактерию от нового
з а р аж ен и я бактериофагом. Л . М. Тарасевич однако считает, что
различий эти х нет, поскольку болезнь может возникнуть не за счет
экзогенного вирусного инокулюма, а в резуль та те ак ти ви р о ван и я
последним существовавшей латентной инфекции.
Причину вспышек спонтанного заб о л ев ан и я шелководы видели
в провокационных (индуцирующих) ф акто р ах — н еб л а гоп ри я тны х
для шелкопряда условиях, влияющих на эмбриональном и постэмбрио-
нальном э тап ах его онтогенеза. В перечне этих факторов, п ровоцирующих
пробуждение спящего вирус а, были названы все без исключения
элементы среды обитания (Ганиева и д р ., 1967): качество корма и его
химический состав, несвойственные шел к оп р яду виды корма (заменители
шелковицы — одуванчик, маклюра и т . д.); гидротермический
режим и освещенность в червоводне, лучевые воздействия на гусениц,
скорость тока во зд у х а , породные особенности шелкопряда. Наконец,
отчетливое провокационное действие на л атентный вирус ок азыв ае т
за р аж ен и е гусениц болезнетворными организмами (Т р о и ц к ая , 1979).
Несмотря на их исключительную разнохарактерность, все они однозначно
проявили себя к ак провокационный фактор (Ганиева и д р .,
1970). Экспериментируя столь широким и потому явно не специфическим
списком провокационных условий, пытались выяснить прежде
всего возможность предотвращения их провокационного в л и я н и я .
Надеялис ь Тскже добиться избавления популяции от латентной инфекции
в р е зу л ь т а т е систематического отсева вирусонссителей под воздействием
индуцирующего фактора.
Были сделаны попытки объяснить механизм действия и н д у к то р о в .
Т ак, А. Е. Карпов и др. (1968), а затем Л . Г. Кишкэ и др. (1972) п о к
а з а л и , что щелочная и панкреатическая Д Н К -а з а вызывает а к т и в и зацию
латентного вируса ядерного полиэдроза у к у ко л о к т у т о в о го
ш ел к оп р яда ; бы ло высказано предположение, что действие щелочной
ДН 1\-азы состоит в нарушении хромосомной стр у кту ры ядерного ап п а рата
насекомого, способствующего л и бер али зац и и провируса и началу
его болезнетворно!! д е я т ел ьн о с ти .
Штейнхауз (1956) предложил рассматривать индукторы к ак с тр ессоры
— факторы, способные вызывать у организмов стресс, изменения
в организме, которые, по учению Г. Селье (1936), призваны противостоять
нарушению гомесстазиса; г о м е о с т а зи с— это относительное
динамическое постоянство, устойчивость состава физико-химических
и биологических свойств внутренней среды которое организм способен
с о х р ан я т ь , несмотря на неб л агоп ри ятны е изменения в среде о би т ания.
Когда р егул я торны й механизм обеспечения нормальных к о л ебаний
физиологических и биохимических констант в относительно у зк и х
гомеостатических гран и ц ах не сп равл яе тся со свсей задачей, ему на
помощь приходит комплекс физиологических мер неспецифического
х ар ак тер а , мобилизующих р я д систем организма — нейрогумораль-
ных, эндокринных, цитологических, ферментативных — в реакции
состояния н ап р яж ен и я орган и зм а, имеющего адаптивную (приспособительную)
направленность, применительно к сложившейся ситуации.
Состояние стресса создает условия д л я перехода латентного провируса
в деятельную форму вируса.
Иммунитет к вирусу ж е л т у х и . Гусеница тутового ш елк оп ряда
явл я е тс я единственной первично инфицируемой экзогенным вирусом
стадией р а зви ти я н асекомого. И зу ч а я возрастные р азли чи я п р о я в л
ен и я относительного иммунитета к вирусу ж ел ту хи у шелковичных
червей, необходимо иметь в виду, что масса растущей гусеницы з а л и чиночный
период увеличивается в 10 тыс. р а з , и, следовательно, с о отв
етственно н ар уш а ет ся сопоставимость доз инокулюма.
Отмечена н екоторая разница в степени восприимчивости к у к о л о к
п ри и ск у с с тв ен н ом з ар аж ен и и на разных э тап ах метаморфоза: молодые
к у к о л к и более восприимчивы, чем те, которые завершают куколочный
период р а з в и ти я . Вирус ядерного полиэдроза в имагинальной тк ан и
не встреч ает необходимых условий д л я активной деятельности. Н е см
отря на то , что и м а г о— стадия р а зв и ти я , д а л ек а я от первичного
эк зо ген н о го з а р аж е н и я насекомого, полиэдры ьсе же встречаются
в тел е бабочки. Н аи б о л е е вероятно, что они наследуются бабочкой от
слабо зар аж ен н ой к у к о л к и , к оторая успела проделать метаморфоз,
несмотря на за р аж ен н о с т ь вирусом ж ел ту х и , и превратиться в бабоч ку.
Вирус, присутствующий в грене, т а кж е лишен условий д л я своего
р а зви ти я , во всяком случае до какого-то финального этапа эмбриог
ене за. Японские ученые обн ар уж и ли в организме тутового ш ел к о п р я да
биогенные противовирусные ингибиторы. Отмечено, что гусеницы,
воспитанные на искусственном корме без примеси порошка из высушенных
листьев шелковицы, более восприимчивы к вирусу желтухи
из-за отсутствия ан ти ви р у сн о го вещества в их кишечном сске (Мат-
су б ар а , Х а яш и я , 1968).
Об участии п ротивовирусного иммунитета на этапе инфицирования
тутового шелкопряда мы пека ничего не знаем. Неизвестно, каки е
факторы ак ти вн о го противодействия насекомого могут встретиться на
пути перемещения вирионов из полости средней кишки к общей полости.
Электронный микроскоп позволил проследить основные этапы
сл едо в ан и я вирионов, но п ризнаков активного противодействия продвижению
вируса по этому пути обн ар уж и т ь не удалесь. Об этом же,
быть может, свидетельствуют хорошо известные факты , что м а л ь е
дозы ви р у с а, введенные естественным путем восприимчивому насекомому,
достигают инфицируемых клеток без ссобых, видимо, потерь,
по пути своего следования и обеспечивают развитие заб о л ев ан и я .
Р еш ающ ая р о л ь , определяющая возможность за р аж ен и я вирусом
к ле тки , принадлежит комплементарнссти ее рецепторов и капсида
вириона. Вероятнее всего, что это гл авнее условие, определяющее
резуль та ти вн ос ть инфицирования вирусом ядерного полиэдроза, и основной
ф а к т о р восприимчивости. Р о л ь дозы в проявлении относительного
иммунитета вероятно определяется, в коне шом счете, болы пей
или меньшей возможностью взаимных ксн т?ктов рецепторов вируса
и кле тки . Вместе с тем специфические особенности рецептороз, т а к ж е
к а к количественное их присутствие по всему фронту инф и ц и руем ой
поверхности, определяется наследственной структурой вируса и н а секомого.
Исходя из э то го , нет ничего невероятного в том очевидном
факте, что между породами тутового шелк опряда наблюдаются значительные
р а зли ч и я в проявлении восприимчивости при искусс твен н ом
до зи р о ван н ом инфицировании.
Еще у ав торов прошлого столетия можно найти у к а зан и я на т о ,
что желтококонные породы более подвержены заболеванию ж е л т у х о й ,
чем беколококонные. Моновольтинные, бивольтинные и п о л и в о л ь ти н -
ные группы пород в этом отношении т а кж е заметно отличаются д р у г
от д р у га . По данным П. Ф. Б ел о в а (Росшелкстанция), у т р е х комби'
наций гибридов—П С х С , К Х К , Д Х Қ —с разной степенью восприимчивости
к вирусу ж ел ту хи дозы полиэдров, способные вызывать
гибель 50% гусениц, соотносятся примерно к а к 1 : 18 :6 8 (ПС6ХСкоро-
р о сп е л а я 2 — 1; К а в к а з i X К а в к а з 2 — 18; Д а й з оХ К а в к а з г — 68). При
этом видно, что исключительно устойчивая к вирусу яп он ск а я порода
Д ай зо в состоянии проявить свои качества и в гибридной комбинации.
Гусеницы р яд а гибридов тутового шелкопряда различаются т а кж е по
устойчивости к абиотическим факторам. С. И. Черныш и В. А. Лухта-
нов (1979) о бн а р уж и л и четкую корреляционную зависимость между
устойчивостью к В Я П и токсичностью д л я гусениц формалина. Гусениц
четвертого возра ст а п о гр уж али в неразведенный 40%-ный форм
алин на различные сроки — от 5 до 80 мин, затем тщ а тел ьн о отмыв
али водой; критерием устойчивости сл уж и л о количество гусен и ц , выживших
через сутки после обработки или перелинявших на пятый
возраст . Наибол ьшие р а зли ч и я по устойчивости к формалину обнаруживаются
через сутки; раннее проявление повышенной устойчивости,
по мнению ав торов, не позволяет объ я сн ят ь наблюдаемые р а зли ч и я
неодинаковой чувствительностью гибридов к индуцирующему вли ян ию
формалина, провоцирующего латентную инфекцию вируса. Метод
позволяет отбирать гибридов с повышенной неспецифической устойчивостью
к другим повреждающим или заражающим а г ен т ам . Предпринимались
попытки различных исследователей селекционировать
ш елк оп ряда по п ри зн аку устойчивости к жел ту х е (Мадрахимов,
1969; Бел ов, 1972).
Наследственно обусловл енная устойчивость или восприимчивость
к ж ел ту х е находится в тесной зависимости от ухода за выкормкой и экол
огических условий, в которых развиваются гусеницы; одно из гл ав ных
условий — оптимизация гигротермического режима. Гусеницы,
выкармливаемые продолжительное время при повышенной температуре
28—3 0 °С, заболевают желтухой значительно легч е, чем при
оптимальной температуре. Инкубационный период болезни зн а ч и тельн
о сокраща ется, когда гусениц содержат при высоких т ем п е р а т
у р а х . При низкой температуре он может за т ян у т ь ся до 13 дн ей , тогда
к ак при высокой ж ел ту х а п оявляе тся через двое-трое су то к . Известно,
что восприимчивость ш ел копряда к ж ел ту х е резко в о зр а ст ае т в летний
период, когда ничтожно малые дозы вируса неизменно вызывают з а б о левание.
При этом инкубационный период летом о к азы в ае тся на д в а -
три дня короче, чем весной, что существенно в эп изоотологическом
отношении. Повышенной заболеваемости выкормок способствует не
тол ько высокая температура, но и вся совокупность условий, которые
ослабляют гусениц летом, включая ухудшение качества корма. Р а з витию
заболевания способс твуе т высокая влажность воздуха. По мнению
Акквы, ж ел ту х а предпочтительно возникает в тех местах, где высо
к а я в л аж н о ст ь сочетается с пониженной тем п ер а ту р ой.
Из всего того, что вызывает отступление от оптимальных условий
д л я жи зн ед ея тел ьн о с ти тутового шелкопряда и в состоянии вы зв а т ь
длительное о сл аб л ен и е его жизненного тон ус а, существуют, видимо,
детерминирующие (определяющие) факторы, непосредственно в л и яю щие
на состояние восприимчивости гусениц к вирусу, но пока допод-
ленно они неизвестны (Михайлов, Ковалев, 1955).
Признаки и течение желтухи. Заболеванию подвержены л и чи н о ч ная
и к у ко л о чна я стадии тутового шелкопряда . У гусениц ж е л ту х а
чаще наблюдается в старших возрастах. О дн ак о встречаются з а б о л е в шие
насекомые и в младщих возраст ах, особенно в тре ть ем .
Инкубационный период заболевания включает в себя два э т а п а :
первый — инва зионный, в течение которого вирионы выходят из п о л и эдров,
первоначально расселяются и внедряются в первично п о р а жаемые
клетки. Второй этап — просимптомный, непосредственно
предшествующий возникновению внешних к линич еских п р и зн а к о в
желтухи; последние вызываются цепью последовательных я вл ен и й :
с размножением вируса часть клеток погибает, деятельность о р г ан о в
нарушается, изменяется нормальное состояние организма гусеницы,
ее поведение и за тем внешний вид.
При одномоментном зар аж ен и и клеток достаточным количеством
вируса кри вая п оявления нового поколения зрелого вируса за к о р о т кий
отрезок к р у то поднимается вверх. При слабом зараж ен и и необходимо
накопление вируса в т к ан я х в резу ль та те его размножения
и последующего повторного самозаражен и я кле ток. Этот ж е процесс
может иметь место не то л ь к о при инфицировании гусениц полиэдрами
из окружающей среды, но и по мере ак тив ации в организме латентного
вируса (Гершензон, 1956).
Судя по резу л ь та там экспериментального за р аж ен и я , инкубационный
период при нормальной выкормочной температуре (22—2 4 °С),
в старших во зр а с т ах вар ьи р у е т от двух до пяти суток, в младших —
несколько короче. При более низких темп ературах сроки п роявлен и я
п ризнаков забол ев ан и я удлиняются. Заболевшие гусеницы с т ан о в я т с я
беспокойными, перестают есть, начинают расп ол зат ьс я и часто падают
на пол с выкормочных стеллажей. В начальный период болезни внешние
п ризнаки отсутствуют и дальнейшее их появление с в я з а н о с пораж
ен и ем клеток кожных покровов гусеницы.
Межсегментарные участки кожных покровов (интерсегментальная
мембрана) набухают в виде кольцевых перехватов (рис. 56). Японские
шелководы считают этот признак наиболее х арактерным д л я яд ер ного
полиэдроза ту то во го шелкопряда и называют его фусидака,
что означает «сильно сегментированные черви». К ож а напря га ет ся,
стан ови т ся блестящей, напоминая промасленную б ум а гу . Желтушным
гусеницам в последнем возрасте свойствен т а кж е п ри зн ак ож и р е н и я :
т е л о их си л ьн о утолщается и несколько у к о р ачи в ае тся , границы с е г ментов
с гл аж и в аю т ся . Ожиревшие гусеницы л еж а т неподвижно, они

немного похожи на окукливающихся гусениц перед нимфальной л и н ь кой
(рис. 57). Молочно-белый (фарфоровый) или сол оменно-жел тый,
шафрановый цвет их обусловлены окраской гемолимфы.
Абэ и Хигути (1979) проследили на гистологических срезах з а
процессом о бразования пятен на коже гусениц при ядерном пэли эдр о -
зе. Пораженные вирусом гиподермальные клетки д е г ен е р и р ую т ;
между ними и экзокутикулой, в толще эндокутикулы, обра зуе тся п р о странство,
в котором сосредоточиваются полиэдры и остатки погибших
клеток, а в самой эндокутикуле откладывается коричневый пигмент.
Гемоциты скапливаются под базальной мембраной в той части, где произошло
отторжение пораженных вирусом клгток гиподермы и к а к бы
подстраховывают процессы восстановления этого участка к ожного
эпителия. Накопление полиэдров в гипертрофированных я д р ах кле-
. ток гиподермы показано на рис. 58.
Во время линьки пятна удаляются
вместе со сброшенной шкуркой. П о к ровы
желтушных гусениц, клеточный
слой которых в значительной ст еп ени
разрушен, легко р ву т ся и из т е ла
обильно вытекает мутная гемолимфа,
молочно-белая или ж е л т а я , в
зависимости от наследственно обусловленной
пигментации крови. И зм е нение
цвета больных гусениц, о п у х а ние
их менее заметно в младших во зрас
тах, но в старших они достаточно хорошо отличаются от здоровых
блестящей, к ак бы промасленной кожей.
Ожиревшие гусеницы могут выделять шелк, но не завивают коконы,
т а к к ак тело их лишено необходимой д л я этого гибкости. Если же
у зрелой гусеницы болезнь не успеет развить ся и она за в ь е т к окон ,
гибель наступает позже в процессе зави вки , а иногда после нее. Т р у п
распадается, истекающая из него ж ел тая или серо-бурая ж идкость
пачкает оболочку кокона. У довитых коконов эта жидкость обычно не
выступает н ар уж у и не образует пятен на их поверхности. Остатки
труп а с помощью этой жидкости прилипают к внутренней поверхности
стен к н кокона и высыхают. При встряхивании глухари не издают
характерного д л я нормальных коконов стука.
С момента появления у желтушных гусениц признаков забо л ев ан и я
проходит несколько дней, затем они становя тся неподвижными и спуст
я один-два дн я погибают.


Очередность поражения вирусом органов и тканей. Еще до т о г о ,
к ак кровяные кле тки и ткани начнут р азр уш а т ь ся , а мириады полиэдров
попадут в гемолимфу и вместе с каплями ж и ра из распадающегося
жирового тела придадут ей мутный вид, гистологическая картина
может продемонстрировать наличие очередности поражения органов
и тканей гусениц вирусом желтухи. Сначала полиэдры п о явл яю т с я
в гемецитах, исключая одну категорию этих клеток — сф ерул оциты,
которые, видимо, не поражаются вирусом; затем o h : i о бн ар уж и в аю тс я
в клетках гиподермы, трахейного матрикса и наружных лопастях ж и р о вого
тела. Когда клетки первой группы почти разрушены, полиэдры
можно увчдеть во внутренних лопастях жирового тела, в соединительнотканной
оболочке мышц, аналогичной ткани половых желез (рис. 59—
60). К а к исключение их обнаруживали в стенках мальпигиевых сосудов
и в эноцитах. В ядрах клеток мышечной тк ан и , слюнных и шелкоотделительных
желез они встречаются крайне р едко, а в нервных и половых
к ле тк ах не были найдены в о е с с . П равда, иногда в стенках шелкоотделительных
желез и в брюшных нервных ганглиях наблюдаются ед и ничные
яд р а , наполненные полиэдрами, но, по мнению Б о го я вл ен ск о го
(1932), эти ядра принадлежат зап олзшим сюда гемоцитам. П о л а г аю т ,
что ядерный полиэдроз чешуекрылых не поражает клетки эп и тели я
средней кишки.

Вирус ядерного полиэдроза являе тся высокоспециализированныг/-
кариотрофом (греч. карион — ядро, трофе — питание). В р а з г а р
забол ев ания, когда клетки тканей первой очереди поражения о к а зы ваются
совершенно разрушенными в т к ан я х и о рган ах последующей
очереди полиэдры то л ько еще начинают обра зовы ват ься (рис. 61).
Внутри отдельного ядра все полиэдры находятся в одинаковой стадии
р а зви ти я , но при исследовании нескольких ядер одного и того ж е
у частка ткани наблюдается разновозрастность их со с то ян и я .
Отмечена повышенная чув ствительность тканей гусениц ту то во го
шелкопряда к присутствию ви р у с а ядерного полиэдроза; она вы р а ж
а е т ся в нарушениях физиолого-функционального х ар а к т ер а у т к а ней,
среди которых встречаются клетки с явными цитопатическнми изменениями,
вызванными вирусом. По данным Абэ (1977), у здоровых
гусениц во время ли н ьки б а за л ьн а я мембрана кле ток жирового т е л а
исчезает, к летки эти приобретают автономию на весь период личиночной
л и н ьки , после чего с т р у к т у р а жирового тела во с стан ав ли в ае тся ;
у желтушных гусениц подобная , регенерация распавшегося жирового
т ел а не наблюдается. Это относится даже к тем сл у ч а ям , когда по состоянию
зар ази вш и х ся гусениц ли н ьк а их о казыв ае тся еще возможной*
Исследуя вли ян и е вирусной инфекции на формирование к у ти к у лы
у шелковичных червей, Абэ (1978) установил, что з ар аж ен и е непосредственно
после ли н ьки вызвало в эпидермальных к ле тк ах через
двое суток цитопатические явления, обычно наблюдаемые у здоровых
гусениц в п ромежутках между линьками; отложения в эпидермальных
к летках гликогена не происходит и р азвитие клеточного слоя в этот
период — его утолщение з а счет удлинения клеток — задерж и ва ется .
Если же инфицированных клеток немного, отложение гликогена
в эпидермисе протека ет нормально и новая кутикул а зак ан чи в а е т
формирование к а к обычно, спустя некоторое время после л и н ь к и .
Д и агн о с ти ка ж е л т у х и . Болезнь проявл яе тс я настолько х а р а к терно,
что внешние признаки чаще всего сл уж ат достаточным осн ов анием
для бесспорного, казалось бы, диагноза. Менее отчетливо выражена
ж елтуха в младших возрастах. Известны случаи, когда линяющих
шелковичных червей принимали з а жел тущных, т а к к ак между ними
в младших во зр а ст ах действительно есть некоторое сходство. Неопытный
наблюдатель может принять наследственно окрашенных в желтый
цвет гусениц, встречающихся в третьем возрасте, за желтушных. В сомнительных
с л у ч а я х следует помнить, что гемолимфа жел тушных гусениц
не п р о зр ачн а я , а мутная и окрашена в желтый или молочно-
белый цвет.
Вместе с тем у д р у ги х вирусных болезней отмечены сходные внешние
признаки. Поэтому при диагностировании инфекционных з а б о л е ваний
чаще всего стрем я тся установить присутствие в о зб у ди т ел я .
Возбудителя ж ел ту хи , в отличие от р яд а д р у ги х вирусных болезней,
можно обнаружить в обычном световом микроскопе, увеличение
Х600 (объектив Х40, о к у л я р Х15), по наличию полиэдров. Если ж е
в зараженном ш е л к о п р я д е ,'г р ен е и други х объектах полиэдров п е т ,
вирус может быть обнаружен при электронномикроскопическом
исследовании или еще быстрее и легч е — серологически. П р о сл еж ен а
особенность хемилюминесценции кожи и гемолимфы тутового шелкопряда
при зар аж ен и и вирусом ядерного полиэдроза (Прилуцкий, К и р и ченко,
1979). Однако эти и некоторые други е методы и ссл едования
(например, радиографический ) не всегда доступны д аж е д л я научного
учреждения, не говоря уже о производственной обстановке.
В неокрашенных п репаратах из растертых гусениц, з аб о л евш и х
ж е л ту х о й , видны полиэдры, жировые к ап ли , ураты и другие кристаллы
, фрагменты кле ток, частицы пищи. Т олько что погибшие гусеницы
могут быть почти свободны от бактерий. Если ж е они есть, то это о зн а чает,
что после гибели гусениц прошло некоторое время и бактерии
в ее открытых полостях успели размнож иться, или ж е , что не явл я е тс я
редкостью д л я ж е л ту х и , отмечена смешанная инфекция, особенно
часто встреч ающаяся на поздневесенних и летних лабораторных вык
о рм к ах .
В конце забо л ев ан и я , когда гемолимфа превратится в мутную
ж идкость , содерж ащую множество полиэдров, их не трудно определить
по форме и по преломляющей способности. В нативном препарате
они н ескол ько напоминают к апел ьки жи ра и, при отсутствии опыта,
их не всегда о бн ар уж и в аю т среди массы жи ровых шариков или кри
сталлов урата. Между тем полиэдры отличаются от этих своих более
или менее постоянных спутников в препарате наличием граней, которые
видны при соответствующей освещенности поля зрен и я и при во звратно-
поступательном вращении микрометрического винта м икроскопа.
Наконец, жировые тел ьц а , в отличие от полиэдров, о к р аш и ваются
суданом и растворимы в эфире. Особенно полезны специальные
методы обработки препарата в начальной стадии заболевания, когд а
в гемолимфе присутствует еще небольшое количество свободно п л ав аю щих
полиэдров, а т а кж е во всех сомнительных сл у ч аях и при ж ел ан и и
получить демонстрационный препарат.
Комарек и Брейндель препарат, обработанный содой, окрашивали
слабым раствором Гимза с дополнительной окраской эозином. Швецова
предложила красить эозином после обработки 1%-ной NaOH.
Акква к р а си л подкисленные и подогреваемые препараты триацидом
Эрлиха. Полиэдры хорошо окрашиваются пикриновой кислотой;
окраска может производиться не то л ько в мазках и гистологических
срезах, где ее дополняют фонирующие красители, но и в раздавленной
капле жидкости под покровным стеклом. Особенно эффективна ок раска
полиэдров пикриновой кислотой с фонированием препарата м ал ахи товой
зеленью (метод А. И. Пахила). Полиэдры вируса ядерного п о ли эдроза
тутового шелкопряда окрашиваются равномерно, но иногда
обн ар уж и в ае тся исчерченность и обра зования, расположенные в центральной
части тел ьц а , которые похожи на мелкие, преломляющие
свет зерныш ки .
В гистологических исследованиях чаще всего в качестве краски
используют прописи гематоксилина. Еще С. Провацек, изучая ж е л туху
тутового шелкопряда, фиксировал гистологический м а тери ал
смесью рас твора сулемы и 90%-ного спирта (2 : 1), затем — после
промывки 60% -ным спиртом с йодом (для удаления с у л ем ы )—о к р а шивал
срезы разведенным гематоксилином Гранахера. Ссйчас п о л ь зуются
многими другими методами фиксации и окраски д л я патогистологических
исследований насекомых.
С ущ е с тв у е т ряд лабораторных приемов исследования гу с ен и ц ,
которыми, в известных сл у ч аях , т а кж е можно воспользоваться д л я
ранней диагностики желтухи на выкормках. Один из этих методов
Эшерих и Мигаюма (1911) впервые применили при отборе д л я опытов
здоровых ли чи н о к бабочки монашенки. Кровь каждой ли чи н ки и с сл
едо в али два-три раза с промежутком в несколько дней. Если при
последнем обследовании полиэдерные тельца пе были найдены ни в п л а з ме
гемолимфы, ни в гемоцитах, гусениц признавали здоровыми и пригодными
дл я опыта. Глезер и Чепмап (1913) применили эту, т а к называемую
кр о в ян ую пробу при исследовании вилта непарного ш ел к о пряда.
Авторы подтвердили, что так о е исследование сл уж и т до с т а то ч но
верным у к азан и ем на отсутствие у насекомого полиэдроза: д в у к
ратн ого исследования с промежутком в несколько дней ок а зы в а е тся
достаточным, чтобы установить отсутствие у насекомого полиэдерной
болезни.
Биологические пробы (обнаружение патогена путем за р аж ен и я
исследуемым материалом восприимчивого организма) в отношении
этого вируса не являют ся в полной мере убедительными, т а к к а к подопытное
насекомое, используемое д л я обн аружен и я вируса, м ожет
ок аза ться носителем латентной инфекции.
Надежными, быстрыми и удобными д л я производственных условий
являются серологические реакции. Впервые у нас в отношении ви р у с а
желтухи они испытаны Лягиным (САНИИШ, 1938), но их более ш и р о к о е
использование станет возможным только после того, к ак будет н ал аж ен о
в научно-исследовательских институтах производство ди а гн о с ти ч е с кой
антисыворотки.
Эпизоотология ж ел ту хи . Основной первоисточник р а с п р о с т р а н е ния
ж елтухи — тутовый шелкопряд; помимо больных гусениц, н о си телем
вируса может быть грена. Н а ск о л ь к о опасен в эп и зоотологи -
ческом отношении этот источник, как часто о н д а е т о с е б е зн а ть и к а к о в
характер эпизоотий, вызванных при его участии, данных слишком
мало, чтобы иметь об этом достаточно надежные суж ден и я. Опасным
способом распространения ж елтухи я в л я е т с я латентная и нфекц и я;
размеры участия этого источника з а ви ся т от степени р а сп р о с т р ан ен ности
л атентного вируса среди гусениц выкармливаемых п оп у л яц и й ,
интенсивности их зараженности, степени устойчивости латентного с о стояния
и наличия пусковых факторов , активирующих п р о ви р у с .
К сожалению, шелководы пока слабо вооружены методически, чтобы
уверенно отвечать на эти вопросы. Основным и, видимо, единственным
инфекционным началом для первичного за р аж ен и я гусениц из э к з о г е н ных
источников, явл яю т ся полиэдры; участие в зараж ении посредством
внешней среды вирионов и нуклеокапсидов вируса, к ак эк зо ген ны х
агентов, исключено. Воротами инфекции, помимо кишечника, н а зы вают
кожные покровы и дыхальца. По данным японских ученых,
естественными воротами инфекции может стать только п оврежд ен н
ая кожа; такой путь инфицирования возможен в р езу л ь т а т е с к а р и фикации
(нанесения царапин) кожных покровов крючьями л ож ны х
н ожек, за гр я зн ен ны х вирусом. Поэтому один из решающих ф ак то р о в ,
способствующих распространению вируса ж елтухи , — ч р е зм ерн а я
плотпость размещения гусениц на выкормочной площади, а наибол ее,
опасный ср о к , во время которого легче повреждаются покровы —
ли н ьк а и первые часы послелиночного периода.
Г у с е н и ц а— основная стадия развития шелкопряда, в о сп р о и зво дящ
ая вирус желтухи в отличие от бабочки, грены и, быть м ожет ,
к у к о л ки . Вне жизнедеятельной растущей клетки вирус не р а зм н ож а ется;
в растущей ткани его численность возрастает очень бы стро
(рис. 62). В куль туре клеток из соединительной оболочки жен ски х
гснад количество вируса желтухи увеличилось через четыре дня
в 1000 раз, а через девять дней — в 10 ООО раз по сравнению с п ер в о начальным
числом (Треджер, 1935). В резу ль та те девяти п а с с аж ей ,
проведенных Треджером, примерно, в течение трех месяцев, к о л и чество
вируса в куль турах клеток увеличилось в 156 25J ООО ООО ООО
р аз. По данным Л . М. Тарасевич (1975), в теле больных насекомых
накапливаются полиэдры, масса которых со с тавл я ет 10—20% от массы
гусеницы. В 10 мг воздушно-сухой навески из тканей насекомого
содержится 5 млн. полиэдров. По данным Г. Б ер то л ь т а , Л Д Ь0 Для
вируса ядерного полиэдроза с о с т а в л
я ет 2,5 X 10_6 г, или 0 ,6— 1,2 млн.
полиэдерных телец. Следовательно,
одна погибшая от желтухи гусеница
тутового шелкопряда в пятом возрасте
способна стать источником з а р аж е н и я
от 500 до 1000 гусениц.
Вирус выделяется из организма
желтушных гусениц с линочной ж и д костью
и шкуркой (экзувием), а т а к же
через ранки на коже, из к о то ры х
выходят н ар уж у в к ап л е мутной г е молимфы
мириады полиэдров и ви р и онов.
По данным японских ав торов,
вирус ж ел ту хи с экскрементами не
выделяется, т а к к а к в эпителии с р ед ней
кишки полиэдров он не обра зуе т.
Обильным источником вируса я в ляются
трупы желтушных гусениц,
которые очень легко подвергаются
механическому повреждению, з а г р я з няют
выкормочную поверхность, п о мещение
выкормки и прилегающие к
нему участки.
Чер ез ск о л ьк о дней с момента
за р аж ен и я в условиях нормального
гигротермического режима выкормки гусеницы становя тся источником
заразы? Инкубационный период болезни в этих условиях продолжается
4—7 дней. З а этот срок полиэдры, попавшие в среднюю
кишку с листом шелковицы, растворяются (через полтора-два часа
с момента за гл а ты в ан и я ), вирус попадает в общую полосгь тел а и
внедряется в к летки тканей (через 6— 12 ч с момента за гла ты ван и я полиэдров).
Чер ез два-три дня в пораженных к ле тк ах гусеницы происходят
цитопатические изменения и набухание ядер, еще через два-
четыре дня в я д р а х появляются мелкие полиэдры, гусеницы приобретают
первые внешние признаки забол ев ан и я и инкубационный период
можно считать законченным. В течение последующих одного-трех
дней внешнее п роявлен и е заболев ан и я усиливает ся; возникает возможность
з а гр я зн ен и я окружающей среды вирусом, которая возрастает
до предела на 7—8-й день с момента за р аж ен и я , но особенно после
гибели и р а зр уш ен и я трупов . Эти сроки могут несколько сокраща ть ся
или значительно увеличиваться; кроме того, зараж ение гусениц в инфицируемой
обстановке вряд ли носит одномоментный харак тер.
В эпизоотологическом отношении наиболее вероятный источник
ж е л ту х и — расположенные по соседству больные выкормки. Переносчиком
инфекции может ок аза ться обслуживающий персонал выкормок,
если в ответ на возникшую эпизоотическую ситуацию не будут
приняты каранти н ные меры предосторожности.

В условиях эксперимента установлена г.озможность з а р аж е н и я
шелковичных червей ядерным полиэдрозом о т дру ги х видов ч еш уекрылых,
в том числе распространенных вредителей х л о п ч а тн и к а ;
среди них чаще д р у ги х встречаются совки — подлинные очаги многих
вирусных инфекций. Средством доставки вируса на выкормки могут
быть пыльные листья шелковицы с тутовых насаждений по обочинам
полей, загря зненные больными насекомыми.
Вирус в полиэдрах хорошо сохраняется во внешней среде, т а к
к а к он достаточно устойчив против действия на него физических ф а к то
р о в . Поэтому внешним источником дл я з а р аж ен и я , помимо больных
выкормок, может о к аза ть с я вирус, сохранившийся в червоводне
или на прилегающей территории после заболевшей выкормки прош л о го
года.X . Ф. Эванс с соавторами (1980) предложили метод количественного
определения вируса ядерного полиэдроза в почве. Ран ее Томас
и д р . (1972) и Н у к у х а р а (1973) разработали методы определения сод
е рж ан и я полиэдров в почве по результатам скарм ли в ан и я гусеницам
иск усс твен н ого корма, зар аж ен н о го суспензией анализируемого почвенного
обра зца . Этот полуколичественный метод не позволяет п олучать
абсолютные величины содержания полиэдров в почве с высокой
степенью точности. Процедура экстра ги ров ан и я по методу Эванса
и др . состоит из дв у х этапов. Сначала суспензированный о б р а зец
почвы подвергается ультразвуковой дезинтеграции с последующим
отстаиванием с десорбентом. Полученный осадок р есу сп ен зи р ую т
и вторично подвергают первоначальным операциям. Слив суп ерн ат
ан т а центрифугируется с умеренной скоростью, декантированный су-
п ерн а тан т вновь центрифугируется, но с большей скоростью, осадок
ре су сп ен зи р у е т ся в воде и подвергается вторично такому ж е ск орос т ному
центрифугированию. Из полученного осадка готовят п р еп ар ат
д л я микроскопического ан али за на присутствие полиэдров. От внес
ен н о го количества полиэдров в концентрации от 6 • 10в до 1 • 105 единиц
на 25 г почвы, в п р епаратах при микроскопировании о б н а р уж и в а е
т с я в среднем 46% полиэдров.
Д о с т а в к а вируса экзогенного происхождения осуществляется р а з личными
переносчиками, посещающими выкормку: мухами, м у р а в ь я ми,
осами, сверчками, мышами, лягушками. Эффективно расп ростран
яют ви рус насекомоядные птицы, к ак это показали И. А. Кириченко
и А. И. Ры х л и ц к а я (1977). Наблюдения проводились ими в течение
дв у х лет на зараж ен ных партиях воробьев и скворцов. Д л я выяснения
ст епени выживаемости вирус а, прошедшего через пищеварительный
т р а к т , птицам спаивали 2 мл суспензии полиэдров с титром 10 тыс. мм3.
Суспензию полиэдров наносили на оперение, л ап к и и клюв. Собранный
материал — экскременты, смывы с оперения и лапок — испол ь зовали
д л я выделения полиэдров. Затем суспензию их скармливали с листом
шелковицы в течение су то к гусеницам тре ть его и пятого возрастов.
В п ар ти ях , за р аж ен ны х в третьем возрасте, о к азал о с ь 20% ж ел туш ных
гусениц и 7 ,7% коконов-гл ухарей, а зар аж ен ны х в пятом возра ст
е — 56% заболевших гусениц и 11,4% коконов-глухарей. Выяснил
ось , что т о л ь к о при однократном поедании птицами заразного материала
они могут выделять его с экскрементами в течение 12 ч или переносить
на л ап к ах и оперении в течение пяти суток. Авторы напоминают
при этом, что, по литературным источникам, вирус ящ у р а воробьи
способны переносить на расстояние 40 км, а скворцы — до 80 км. Следов
ател ьно, выбрасывание с подстилкой больных и мертвых гусениц,
где они могут быть съедены птицами, недопустимо. Не то л ько свобод-
ноживущие пернатые, но и домашние птицы в состоянии расп ространять
инфекцию из отходов выкормки.